现代生物医学进展
現代生物醫學進展
현대생물의학진전
PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE
2007年
10期
1445-1447,1450
,共4页
陈晓波%秦杰%焦洋%钟翠平%谭建明
陳曉波%秦傑%焦洋%鐘翠平%譚建明
진효파%진걸%초양%종취평%담건명
腺病毒载体%细胞因子信号抑制因子-1%树突状细胞
腺病毒載體%細胞因子信號抑製因子-1%樹突狀細胞
선병독재체%세포인자신호억제인자-1%수돌상세포
目的:构建含小鼠细胞因子信号抑制因子-1基因(SOCS1)的重组腺病毒载体(AdSF35-SOCS1),探讨其介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达.方法:设计含AgeI和NheI酶切位点的SOCS1基因上下游引物,以质粒pEF-FLAG-1/mSOCS1为模版,通过PCR扩增获得SOCS1全部序列,片段回收后经AgeI和NheI酶切,再定向插入到经AgeI和NheI酶切的质粒pDC316-LacZa中,获得重组穿梭质粒pDC316-SOCS1,经AgeI和NheI酶切、PCR及测序等鉴定后,用脂质体将穿梭质粒pDC316-SOCSl与腺病毒骨架质粒pBHGF35共转染293细胞,经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5F35-SOCS1,行PCR鉴定,经293细胞扩增、纯化制备高滴度病毒液,TCID50法测定病毒滴度.用获得的重组腺病毒感染小鼠树突状细胞,以免疫组化检测SOCS1的表达.结果:成功构建了舍小鼠SOCS1基因的重组腺病毒栽体,病毒感染滴度为1.4×10IU/ml,该载体能有效介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达.结论:重组腺病毒载体能将SOCS1基因转入小鼠树突状细胞并有效表达,为基因转染制备耐受性树突状细胞奠定了基础.
目的:構建含小鼠細胞因子信號抑製因子-1基因(SOCS1)的重組腺病毒載體(AdSF35-SOCS1),探討其介導SOCS1基因在小鼠樹突狀細胞中的錶達.方法:設計含AgeI和NheI酶切位點的SOCS1基因上下遊引物,以質粒pEF-FLAG-1/mSOCS1為模版,通過PCR擴增穫得SOCS1全部序列,片段迴收後經AgeI和NheI酶切,再定嚮插入到經AgeI和NheI酶切的質粒pDC316-LacZa中,穫得重組穿梭質粒pDC316-SOCS1,經AgeI和NheI酶切、PCR及測序等鑒定後,用脂質體將穿梭質粒pDC316-SOCSl與腺病毒骨架質粒pBHGF35共轉染293細胞,經位點特異性重組穫得重組腺病毒Ad5F35-SOCS1,行PCR鑒定,經293細胞擴增、純化製備高滴度病毒液,TCID50法測定病毒滴度.用穫得的重組腺病毒感染小鼠樹突狀細胞,以免疫組化檢測SOCS1的錶達.結果:成功構建瞭捨小鼠SOCS1基因的重組腺病毒栽體,病毒感染滴度為1.4×10IU/ml,該載體能有效介導SOCS1基因在小鼠樹突狀細胞中的錶達.結論:重組腺病毒載體能將SOCS1基因轉入小鼠樹突狀細胞併有效錶達,為基因轉染製備耐受性樹突狀細胞奠定瞭基礎.
목적:구건함소서세포인자신호억제인자-1기인(SOCS1)적중조선병독재체(AdSF35-SOCS1),탐토기개도SOCS1기인재소서수돌상세포중적표체.방법:설계함AgeI화NheI매절위점적SOCS1기인상하유인물,이질립pEF-FLAG-1/mSOCS1위모판,통과PCR확증획득SOCS1전부서렬,편단회수후경AgeI화NheI매절,재정향삽입도경AgeI화NheI매절적질립pDC316-LacZa중,획득중조천사질립pDC316-SOCS1,경AgeI화NheI매절、PCR급측서등감정후,용지질체장천사질립pDC316-SOCSl여선병독골가질립pBHGF35공전염293세포,경위점특이성중조획득중조선병독Ad5F35-SOCS1,행PCR감정,경293세포확증、순화제비고적도병독액,TCID50법측정병독적도.용획득적중조선병독감염소서수돌상세포,이면역조화검측SOCS1적표체.결과:성공구건료사소서SOCS1기인적중조선병독재체,병독감염적도위1.4×10IU/ml,해재체능유효개도SOCS1기인재소서수돌상세포중적표체.결론:중조선병독재체능장SOCS1기인전입소서수돌상세포병유효표체,위기인전염제비내수성수돌상세포전정료기출.
