CAJ | 학술논문

目的构建东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库,为筛选东方田鼠抗血吸虫感染抗性相关基因奠定基础.方法用TRIzol试剂提取东方田鼠肺脏总RNA,分离纯化mRNA,经反转录合成双链cDNA.在双链cDNA 末端加上定向EcoRⅠ/Hind Ⅲ接头并用EcoRⅠ和Hind Ⅲ消化,使其两端分别带EcoRⅠ和Hind Ⅲ黏性末端.用Mini Column纯化,收集300 bp以上的双链cDNA 片段,再连接于带有EcoRⅠ和Hind Ⅲ末端的T7 Select 10-3b载体,经体外包装后,以BLT5403为受体菌构建T7噬菌体展示cDNA文库.结果经测定,库容量为1.5×106 pfu,扩增后文库滴度为1.1×1012 pfu/ml.对从原始文库中随机挑取的100个噬菌斑进行PCR鉴定,重组率为91%,阳性克隆片段长度分布在200～1500 bp,其中有90%的插入片段＞300 bp.结论成功构建了东方田鼠肺脏T7噬菌体展示cDNA文库.
목적 구건동방전서폐장T7서균체전시cDNA문고,위사선동방전서항혈흡충감염항성상관기인전정기출.방법 용TRIzol시제제취동방전서폐장총RNA,분리순화mRNA,경반전록합성쌍련cDNA.재쌍련cDNA 말단가상정향EcoRⅠ/Hind Ⅲ접두병용EcoRⅠ화Hind Ⅲ소화,사기량단분별대EcoRⅠ화Hind Ⅲ점성말단.용Mini Column순화,수집300 bp이상적쌍련cDNA 편단,재련접우대유EcoRⅠ화Hind Ⅲ말단적T7 Select 10-3b재체,경체외포장후,이BLT5403위수체균구건T7서균체전시cDNA문고.결과 경측정,고용량위1.5×106 pfu,확증후문고적도위1.1×1012 pfu/ml.대종원시문고중수궤도취적100개서균반진행PCR감정,중조솔위91%,양성극륭편단장도분포재200～1500 bp,기중유90%적삽입편단＞300 bp.결론 성공구건료동방전서폐장T7서균체전시cDNA문고.