可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备
가표체인호흡도합포병독융합단백보조병독의뢰형선병독재체적구건여제비
Construction and preparation of helper-dependent adenoviral vector expressing human respiratory syncytial virus F gene
  • 万方数据
    微生物学报 미생물학보
    ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
    2007年 4期 682-685 ,共4页

    杨兵%何金生%石长信%张梅%虞结梅%谢灿%陆燕燕%付远辉%彭向雷%洪涛

    양병%하금생%석장신%장매%우결매%사찬%륙연연%부원휘%팽향뢰%홍도

    辅助病毒依赖型腺病毒载体%人呼吸道合胞病毒融合蛋白%逆转录聚合酶链式反应%免疫印迹 輔助病毒依賴型腺病毒載體%人呼吸道閤胞病毒融閤蛋白%逆轉錄聚閤酶鏈式反應%免疫印跡
    보조병독의뢰형선병독재체%인호흡도합포병독융합단백%역전록취합매련식반응%면역인적
    构建可表达A亚型人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus,RSV)融合蛋白(fusion protein,F)的辅助病毒依赖型腺病毒载体(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),并完成大量制备、纯化和F蛋白的体外表达鉴定.将带有CMV启动子序列的F基因亚克隆至克隆载体pSC11,鉴定正确后,克隆至HDAd质粒pSC15B,构建pSC15B/F HDAd重组质粒,Pme Ⅰ消化pSC15B/F去除原核复制元件及抗性基因,获得HDAd/F DNA分子,经磷酸钙共沉淀法转染293Cre4细胞,16h后感染辅助病毒,收获HDAd/F载体粗提液,随后以HDAd/F粗提液及辅助病毒连续共感染293Cre4细胞直至HDAd/F达到复制极限,同时以可表达β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,LacZ)报告基因的HDAdLacZ载体作为平行对照监测载体复制过程.与辅助病毒共感染293Cre4细胞进一步扩增HDAd/F、CsCl梯度法超速离心制备大量纯化的HDAd/F载体,体外感染293细胞,RT-PCR检测到F基因有转录,Western blot分析表明F蛋白有特异性表达.总之,成功构建HDAd/F载体并在真核细胞中实现表达,为体内免疫学效力试验奠定基础,为研制RSV疫苗提供了一种新方法.
    구건가표체A아형인호흡도합포병독(human respiratory syncytial virus,RSV)융합단백(fusion protein,F)적보조병독의뢰형선병독재체(helper-dependent adenoviral vector,HDAd),병완성대량제비、순화화F단백적체외표체감정.장대유CMV계동자서렬적F기인아극륭지극륭재체pSC11,감정정학후,극륭지HDAd질립pSC15B,구건pSC15B/F HDAd중조질립,Pme Ⅰ소화pSC15B/F거제원핵복제원건급항성기인,획득HDAd/F DNA분자,경린산개공침정법전염293Cre4세포,16h후감염보조병독,수획HDAd/F재체조제액,수후이HDAd/F조제액급보조병독련속공감염293Cre4세포직지HDAd/F체도복제겁한,동시이가표체β-반유당감매(β-galactosidase,LacZ)보고기인적HDAdLacZ재체작위평행대조감측재체복제과정.여보조병독공감염293Cre4세포진일보확증HDAd/F、CsCl제도법초속리심제비대량순화적HDAd/F재체,체외감염293세포,RT-PCR검측도F기인유전록,Western blot분석표명F단백유특이성표체.총지,성공구건HDAd/F재체병재진핵세포중실현표체,위체내면역학효력시험전정기출,위연제RSV역묘제공료일충신방법.
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