中国水产科学
中國水產科學
중국수산과학
Journal of Fishery Sciences of China
2006年
2期
305-309
,共5页
吴任%谢数涛%孙勇%完颜小青%张其中
吳任%謝數濤%孫勇%完顏小青%張其中
오임%사수도%손용%완안소청%장기중
凡纳滨对虾%热休克蛋白70%原核表达
凡納濱對蝦%熱休剋蛋白70%原覈錶達
범납빈대하%열휴극단백70%원핵표체
将凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)热休克蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)克隆到原核表达载体pET-3c中,经酶切和DNA测序鉴定后,将重组质粒转入表达宿主BL21(DE3),在不同温度、时间下经IPTG诱导表达,收集菌液,进行SDS-PAGE和Western blot检测,并用软件Bandscan分析蛋白表达水平.结果表明,成功构建含凡纳滨对虾HSP70基因的重组表达载体pET-3c/HSP70,表达的目标蛋白相对分子量约为72 kD,并能与小鼠抗人HSP70抗体特异性结合.37℃诱导5 h目标蛋白表达量最高;但25℃诱导目标蛋白的可溶性比例达80%,目标蛋白占全菌总蛋白70%以上,均较37℃为高.
將凡納濱對蝦(Litopenaeus vannamei)熱休剋蛋白70基因(heat shock protein 70,HSP70)剋隆到原覈錶達載體pET-3c中,經酶切和DNA測序鑒定後,將重組質粒轉入錶達宿主BL21(DE3),在不同溫度、時間下經IPTG誘導錶達,收集菌液,進行SDS-PAGE和Western blot檢測,併用軟件Bandscan分析蛋白錶達水平.結果錶明,成功構建含凡納濱對蝦HSP70基因的重組錶達載體pET-3c/HSP70,錶達的目標蛋白相對分子量約為72 kD,併能與小鼠抗人HSP70抗體特異性結閤.37℃誘導5 h目標蛋白錶達量最高;但25℃誘導目標蛋白的可溶性比例達80%,目標蛋白佔全菌總蛋白70%以上,均較37℃為高.
장범납빈대하(Litopenaeus vannamei)열휴극단백70기인(heat shock protein 70,HSP70)극륭도원핵표체재체pET-3c중,경매절화DNA측서감정후,장중조질립전입표체숙주BL21(DE3),재불동온도、시간하경IPTG유도표체,수집균액,진행SDS-PAGE화Western blot검측,병용연건Bandscan분석단백표체수평.결과표명,성공구건함범납빈대하HSP70기인적중조표체재체pET-3c/HSP70,표체적목표단백상대분자량약위72 kD,병능여소서항인HSP70항체특이성결합.37℃유도5 h목표단백표체량최고;단25℃유도목표단백적가용성비례체80%,목표단백점전균총단백70%이상,균교37℃위고.
