首都医科大学学报
首都醫科大學學報
수도의과대학학보
JOURNAL OF CAPITAL UNIVERSITY OF MEDICAL SCIENCES
2006年
2期
158-161
,共4页
魏骏飞%顾园%王少华%杨静%黄松%诸欣平
魏駿飛%顧園%王少華%楊靜%黃鬆%諸訢平
위준비%고완%왕소화%양정%황송%제흔평
旋毛虫%毕赤酵母%Ts87%表达
鏇毛蟲%畢赤酵母%Ts87%錶達
선모충%필적효모%Ts87%표체
目的优化旋毛虫抗原基因Ts87在毕赤酵母系统中的表达,提高其表达量.方法选择去除自身信号肽序列的Ts87基因构建天然N末端的重组质粒,电击转化经锂盐处理过的酵母细胞X-33,摸索诱导起始细胞浓度、甲醇诱导浓度及其添加的时间间隔、pH值及诱导时间等条件对重组菌株表达的影响,并对表达产物进行Western blotting鉴定.结果采用锂盐处理毕赤酵母细胞的感受态制备方法可以极大的提高电击转化效率,并确定pPICZaA-Ts87nature/X-33株最佳表达条件为:OD600 nm=1.0,1.0%/24 h体积比添加甲醇,pH值7.0或8.0,诱导表达72 h.将此条件下的培养物上清液30μL直接上样,表达产物可被感染旋毛虫的兔血清所识别.结论本研究优化了Ts87在毕赤酵母系统中的表达条件,为后续研究工作打下基础.
目的優化鏇毛蟲抗原基因Ts87在畢赤酵母繫統中的錶達,提高其錶達量.方法選擇去除自身信號肽序列的Ts87基因構建天然N末耑的重組質粒,電擊轉化經鋰鹽處理過的酵母細胞X-33,摸索誘導起始細胞濃度、甲醇誘導濃度及其添加的時間間隔、pH值及誘導時間等條件對重組菌株錶達的影響,併對錶達產物進行Western blotting鑒定.結果採用鋰鹽處理畢赤酵母細胞的感受態製備方法可以極大的提高電擊轉化效率,併確定pPICZaA-Ts87nature/X-33株最佳錶達條件為:OD600 nm=1.0,1.0%/24 h體積比添加甲醇,pH值7.0或8.0,誘導錶達72 h.將此條件下的培養物上清液30μL直接上樣,錶達產物可被感染鏇毛蟲的兔血清所識彆.結論本研究優化瞭Ts87在畢赤酵母繫統中的錶達條件,為後續研究工作打下基礎.
목적우화선모충항원기인Ts87재필적효모계통중적표체,제고기표체량.방법선택거제자신신호태서렬적Ts87기인구건천연N말단적중조질립,전격전화경리염처리과적효모세포X-33,모색유도기시세포농도、갑순유도농도급기첨가적시간간격、pH치급유도시간등조건대중조균주표체적영향,병대표체산물진행Western blotting감정.결과채용리염처리필적효모세포적감수태제비방법가이겁대적제고전격전화효솔,병학정pPICZaA-Ts87nature/X-33주최가표체조건위:OD600 nm=1.0,1.0%/24 h체적비첨가갑순,pH치7.0혹8.0,유도표체72 h.장차조건하적배양물상청액30μL직접상양,표체산물가피감염선모충적토혈청소식별.결론본연구우화료Ts87재필적효모계통중적표체조건,위후속연구공작타하기출.
