福建医科大学学报
福建醫科大學學報
복건의과대학학보
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY
2006年
2期
121-124
,共4页
神经酰胺类%基因,bcl-2%Caspase-3%癌,肝细胞%肿瘤细胞,培养的%细胞凋亡(脱噬作用)
神經酰胺類%基因,bcl-2%Caspase-3%癌,肝細胞%腫瘤細胞,培養的%細胞凋亡(脫噬作用)
신경선알류%기인,bcl-2%Caspase-3%암,간세포%종류세포,배양적%세포조망(탈서작용)
目的观察无血清条件下bcl-2对神经酰胺诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的影响.方法通过脂质体介导的基因转染,建立稳定转染表达反义bcl-2 mRNA的cDNA片段的真核表达质粒的人肝癌细胞HepG2(HepG2-anti-bcl-2)并鉴定,采用AO-EB荧光染色、流式细胞术DNA倍体分析和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,分光光度法测定Caspase-3活性.结果终浓度50 μmol/L C2-神经酰胺作用24 h,可诱导无血清培养的HepG2细胞、HepG2-vector细胞及HepG2-anti-bcl-2细胞发生凋亡.AO-EB染色可见典型的细胞凋亡表现.流式细胞仪检测显示C2-神经酰胺作用12,18,24 h,HepG2-anti-bcl-2细胞凋亡率较同时间HepG2细胞及HepG2-vector细胞凋亡率显著增加(P<0.05).终浓度50 μmol/L C2-神经酰胺作用12 h,HepG2-anti-bcl-2细胞DNA凝胶电泳呈现梯状条带,而HepG2 细胞及HepG2-vector细胞作用24 h出现DNA梯状条带.HepG2细胞和HepG2-vector细胞Caspase-3活性随C2-神经酰胺(50 μmol/L)作用时间延长而增强,HepG2-anti-bcl-2细胞Caspase-3活性始终维持较高水平.结论低表达bcl-2可通过增加Caspase-3活性从而促进C2-神经酰胺诱导的HepG2细胞凋亡.
目的觀察無血清條件下bcl-2對神經酰胺誘導人肝癌細胞HepG2凋亡的影響.方法通過脂質體介導的基因轉染,建立穩定轉染錶達反義bcl-2 mRNA的cDNA片段的真覈錶達質粒的人肝癌細胞HepG2(HepG2-anti-bcl-2)併鑒定,採用AO-EB熒光染色、流式細胞術DNA倍體分析和DNA瓊脂糖凝膠電泳檢測細胞凋亡,分光光度法測定Caspase-3活性.結果終濃度50 μmol/L C2-神經酰胺作用24 h,可誘導無血清培養的HepG2細胞、HepG2-vector細胞及HepG2-anti-bcl-2細胞髮生凋亡.AO-EB染色可見典型的細胞凋亡錶現.流式細胞儀檢測顯示C2-神經酰胺作用12,18,24 h,HepG2-anti-bcl-2細胞凋亡率較同時間HepG2細胞及HepG2-vector細胞凋亡率顯著增加(P<0.05).終濃度50 μmol/L C2-神經酰胺作用12 h,HepG2-anti-bcl-2細胞DNA凝膠電泳呈現梯狀條帶,而HepG2 細胞及HepG2-vector細胞作用24 h齣現DNA梯狀條帶.HepG2細胞和HepG2-vector細胞Caspase-3活性隨C2-神經酰胺(50 μmol/L)作用時間延長而增彊,HepG2-anti-bcl-2細胞Caspase-3活性始終維持較高水平.結論低錶達bcl-2可通過增加Caspase-3活性從而促進C2-神經酰胺誘導的HepG2細胞凋亡.
목적관찰무혈청조건하bcl-2대신경선알유도인간암세포HepG2조망적영향.방법통과지질체개도적기인전염,건립은정전염표체반의bcl-2 mRNA적cDNA편단적진핵표체질립적인간암세포HepG2(HepG2-anti-bcl-2)병감정,채용AO-EB형광염색、류식세포술DNA배체분석화DNA경지당응효전영검측세포조망,분광광도법측정Caspase-3활성.결과종농도50 μmol/L C2-신경선알작용24 h,가유도무혈청배양적HepG2세포、HepG2-vector세포급HepG2-anti-bcl-2세포발생조망.AO-EB염색가견전형적세포조망표현.류식세포의검측현시C2-신경선알작용12,18,24 h,HepG2-anti-bcl-2세포조망솔교동시간HepG2세포급HepG2-vector세포조망솔현저증가(P<0.05).종농도50 μmol/L C2-신경선알작용12 h,HepG2-anti-bcl-2세포DNA응효전영정현제상조대,이HepG2 세포급HepG2-vector세포작용24 h출현DNA제상조대.HepG2세포화HepG2-vector세포Caspase-3활성수C2-신경선알(50 μmol/L)작용시간연장이증강,HepG2-anti-bcl-2세포Caspase-3활성시종유지교고수평.결론저표체bcl-2가통과증가Caspase-3활성종이촉진C2-신경선알유도적HepG2세포조망.
