病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2006年
2期
107-113
,共7页
王力华%付士红%唐青%杨益良%梁国栋
王力華%付士紅%唐青%楊益良%樑國棟
왕력화%부사홍%당청%양익량%량국동
辛德毕斯病毒%融合PCR%嵌合病毒%cDNA克隆%E1糖蛋白
辛德畢斯病毒%融閤PCR%嵌閤病毒%cDNA剋隆%E1糖蛋白
신덕필사병독%융합PCR%감합병독%cDNA극륭%E1당단백
利用三重融合PCR法,即将3个DNA片段放在同一个反应里进行长片段PCR扩增法,融合得到了包含辛德毕斯病毒 XJ-160株结构基因E3、E2、6K、3′UTR和辛德毕斯病毒YN87448株结构基因E1的融合DNA片段E3E26KE13′UTR.通过此融合片段两端引入的Xba I和Xho I酶切位点将其连接到XJ-160株的感染性全基因组cDNA克隆骨架上,成功构建了辛德毕斯病毒株XJ-160与YN87448外膜糖蛋白基因E1相互替换的嵌合病毒cDNA克隆,命名为pBR-XJ160YE1.该克隆线性化后经体外转录,RNA转录体脂质体法转染BHK-21细胞,36h后细胞发生病变.间接免疫荧光检测到病毒蛋白的表达.提取5次传代后细胞上清中病毒RNA,RT-PCR法检测证明病毒来源于嵌合病毒cDNA克隆.此感染性辛德毕斯嵌合病毒cDNA克隆可以作为研究辛德毕斯病毒E1糖蛋白基因相关功能及XJ-160病毒和YN87448病毒存在单方向血清学反应的分子机理的分子生物学工具.
利用三重融閤PCR法,即將3箇DNA片段放在同一箇反應裏進行長片段PCR擴增法,融閤得到瞭包含辛德畢斯病毒 XJ-160株結構基因E3、E2、6K、3′UTR和辛德畢斯病毒YN87448株結構基因E1的融閤DNA片段E3E26KE13′UTR.通過此融閤片段兩耑引入的Xba I和Xho I酶切位點將其連接到XJ-160株的感染性全基因組cDNA剋隆骨架上,成功構建瞭辛德畢斯病毒株XJ-160與YN87448外膜糖蛋白基因E1相互替換的嵌閤病毒cDNA剋隆,命名為pBR-XJ160YE1.該剋隆線性化後經體外轉錄,RNA轉錄體脂質體法轉染BHK-21細胞,36h後細胞髮生病變.間接免疫熒光檢測到病毒蛋白的錶達.提取5次傳代後細胞上清中病毒RNA,RT-PCR法檢測證明病毒來源于嵌閤病毒cDNA剋隆.此感染性辛德畢斯嵌閤病毒cDNA剋隆可以作為研究辛德畢斯病毒E1糖蛋白基因相關功能及XJ-160病毒和YN87448病毒存在單方嚮血清學反應的分子機理的分子生物學工具.
이용삼중융합PCR법,즉장3개DNA편단방재동일개반응리진행장편단PCR확증법,융합득도료포함신덕필사병독 XJ-160주결구기인E3、E2、6K、3′UTR화신덕필사병독YN87448주결구기인E1적융합DNA편단E3E26KE13′UTR.통과차융합편단량단인입적Xba I화Xho I매절위점장기련접도XJ-160주적감염성전기인조cDNA극륭골가상,성공구건료신덕필사병독주XJ-160여YN87448외막당단백기인E1상호체환적감합병독cDNA극륭,명명위pBR-XJ160YE1.해극륭선성화후경체외전록,RNA전록체지질체법전염BHK-21세포,36h후세포발생병변.간접면역형광검측도병독단백적표체.제취5차전대후세포상청중병독RNA,RT-PCR법검측증명병독래원우감합병독cDNA극륭.차감염성신덕필사감합병독cDNA극륭가이작위연구신덕필사병독E1당단백기인상관공능급XJ-160병독화YN87448병독존재단방향혈청학반응적분자궤리적분자생물학공구.
