安徽农业大学学报
安徽農業大學學報
안휘농업대학학보
JOURNAL OF ANHUI AGRICULTURAL UNIVERSITY
2006年
1期
51-55
,共5页
徐志本%余为一%仲大莲%李槿年%周杰
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鸡MHCⅡ%β链基因%克隆%原核表达
鷄MHCⅡ%β鏈基因%剋隆%原覈錶達
계MHCⅡ%β련기인%극륭%원핵표체
用自行设计的1对引物,通过RT-PCR从鸡脾细胞中分别克隆了鸡MHCⅡβ链基因片段,大小为798 bp.核苷酸测序结果表明,与已登录的基因序列同源性为95%.将该基因片段插入含谷胱甘肽(GST)基因的质粒pGEX-4T-1,构建了pGEX-4T-1-chMHCⅡβ.经诱导表达,获得分子大小约为53 000的融合蛋白,其中chMHCⅡβ链大小约27 000.经亲和层析,获得纯化GST-β融合蛋白,进一步用此蛋白免疫小鼠,制备了鼠源抗鸡MHCⅡβ链抗体.经过琼扩和ELISA检测,表明该融合蛋白具有良好的抗原性.
用自行設計的1對引物,通過RT-PCR從鷄脾細胞中分彆剋隆瞭鷄MHCⅡβ鏈基因片段,大小為798 bp.覈苷痠測序結果錶明,與已登錄的基因序列同源性為95%.將該基因片段插入含穀胱甘肽(GST)基因的質粒pGEX-4T-1,構建瞭pGEX-4T-1-chMHCⅡβ.經誘導錶達,穫得分子大小約為53 000的融閤蛋白,其中chMHCⅡβ鏈大小約27 000.經親和層析,穫得純化GST-β融閤蛋白,進一步用此蛋白免疫小鼠,製備瞭鼠源抗鷄MHCⅡβ鏈抗體.經過瓊擴和ELISA檢測,錶明該融閤蛋白具有良好的抗原性.
용자행설계적1대인물,통과RT-PCR종계비세포중분별극륭료계MHCⅡβ련기인편단,대소위798 bp.핵감산측서결과표명,여이등록적기인서렬동원성위95%.장해기인편단삽입함곡광감태(GST)기인적질립pGEX-4T-1,구건료pGEX-4T-1-chMHCⅡβ.경유도표체,획득분자대소약위53 000적융합단백,기중chMHCⅡβ련대소약27 000.경친화층석,획득순화GST-β융합단백,진일보용차단백면역소서,제비료서원항계MHCⅡβ련항체.경과경확화ELISA검측,표명해융합단백구유량호적항원성.
