科学通报
科學通報
과학통보
CHINESE SCIENCE BULLETIN
2003年
11期
1191-1196
,共6页
聂玉春%柯叶艳%王在%于翔%邓宏魁%丁明孝
聶玉春%柯葉豔%王在%于翔%鄧宏魁%丁明孝
섭옥춘%가협염%왕재%우상%산굉괴%정명효
水疱性口炎病毒%L蛋白%复制酶%定位%转染
水皰性口炎病毒%L蛋白%複製酶%定位%轉染
수포성구염병독%L단백%복제매%정위%전염
水疱性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV) L蛋白是该病毒复制酶的主要成分,分子量约为241 kD.通过构建L蛋白缺失突变体与绿色荧光蛋白(GFP)融合基因的方式,将融合蛋白置于T7启动子或CMV启动子下游,在多种动物细胞中瞬时表达了重组的融合蛋白.荧光显微镜观察结果显示,仅保留N端96个氨基酸残基或缺失N端120个以上残基时,融合蛋白均匀分布于整个细胞质中,而含有N端120个以上残基时,融合蛋白呈点状或局部分布于核周围部位.截取L蛋白96～120氨基酸片段,连接到GFP蛋白氨基端,同样融合蛋白亦特异性地分布到核周围局部区域.进一步研究含定位信号的25个残基片段发现,仅13个残基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108～120)就具有定位功能,缺失D或V均导致定位信号完全丧失.含有这13个残基的GFP融合蛋白,在多种细胞和不同表达模式下均显示了同样的分布规律,表明L蛋白N端这种定位信号具有独立的定位功能,并且在不同细胞中是保守的.
水皰性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV) L蛋白是該病毒複製酶的主要成分,分子量約為241 kD.通過構建L蛋白缺失突變體與綠色熒光蛋白(GFP)融閤基因的方式,將融閤蛋白置于T7啟動子或CMV啟動子下遊,在多種動物細胞中瞬時錶達瞭重組的融閤蛋白.熒光顯微鏡觀察結果顯示,僅保留N耑96箇氨基痠殘基或缺失N耑120箇以上殘基時,融閤蛋白均勻分佈于整箇細胞質中,而含有N耑120箇以上殘基時,融閤蛋白呈點狀或跼部分佈于覈週圍部位.截取L蛋白96～120氨基痠片段,連接到GFP蛋白氨基耑,同樣融閤蛋白亦特異性地分佈到覈週圍跼部區域.進一步研究含定位信號的25箇殘基片段髮現,僅13箇殘基的肽段QGYSFLHEVDKEA(108～120)就具有定位功能,缺失D或V均導緻定位信號完全喪失.含有這13箇殘基的GFP融閤蛋白,在多種細胞和不同錶達模式下均顯示瞭同樣的分佈規律,錶明L蛋白N耑這種定位信號具有獨立的定位功能,併且在不同細胞中是保守的.
수포성구염병독(vesicular stomatitis virus,VSV) L단백시해병독복제매적주요성분,분자량약위241 kD.통과구건L단백결실돌변체여록색형광단백(GFP)융합기인적방식,장융합단백치우T7계동자혹CMV계동자하유,재다충동물세포중순시표체료중조적융합단백.형광현미경관찰결과현시,부보류N단96개안기산잔기혹결실N단120개이상잔기시,융합단백균균분포우정개세포질중,이함유N단120개이상잔기시,융합단백정점상혹국부분포우핵주위부위.절취L단백96～120안기산편단,련접도GFP단백안기단,동양융합단백역특이성지분포도핵주위국부구역.진일보연구함정위신호적25개잔기편단발현,부13개잔기적태단QGYSFLHEVDKEA(108～120)취구유정위공능,결실D혹V균도치정위신호완전상실.함유저13개잔기적GFP융합단백,재다충세포화불동표체모식하균현시료동양적분포규률,표명L단백N단저충정위신호구유독립적정위공능,병차재불동세포중시보수적.
