CAJ | 학술논문

腺病毒5型E1A(Ad5E1A)作为一个抑癌基因, 由于具有较强抑癌作用及显著的化放疗增敏作用而受到人们的关注. 但由于它能整合到宿主细胞基因组中长期表达, 并能使Rb基因失活, 使动物细胞永生化等而引起人们的担心. 为了避免E1A在基因治疗中存在的问题, 设想以E1A蛋白进行探索. 首先构建了E1A真核表达载体(pPIC9/E1A), 转化毕赤酵母(GS115), 筛选高表达重组菌株. 经摇瓶试验, 甲醇诱导表达3 d后, 分泌型的E1A蛋白经HiTrap Q 和HiTrap SP两步柱层析, 获得了较高纯度的E1A蛋白, 并经SDS-PAGE 和Western blot 鉴定. E1A蛋白经Chariot介导能顺利进入细胞, 并大部分定位在细胞核, 使LN686细胞发生明显的G2/M期阻滞, 体外能显著抑制LN686肿瘤细胞生长. 为利用E1A蛋白在肿瘤治疗中应用的可能性提供了实验依据.
선병독5형E1A(Ad5E1A)작위일개억암기인, 유우구유교강억암작용급현저적화방료증민작용이수도인문적관주. 단유우타능정합도숙주세포기인조중장기표체, 병능사Rb기인실활, 사동물세포영생화등이인기인문적담심. 위료피면E1A재기인치료중존재적문제, 설상이E1A단백진행탐색. 수선구건료E1A진핵표체재체(pPIC9/E1A), 전화필적효모(GS115), 사선고표체중조균주. 경요병시험, 갑순유도표체3 d후, 분비형적E1A단백경HiTrap Q 화HiTrap SP량보주층석, 획득료교고순도적E1A단백, 병경SDS-PAGE 화Western blot 감정. E1A단백경Chariot개도능순리진입세포, 병대부분정위재세포핵, 사LN686세포발생명현적G2/M기조체, 체외능현저억제LN686종류세포생장. 위이용E1A단백재종류치료중응용적가능성제공료실험의거.