解放军医学杂志
解放軍醫學雜誌
해방군의학잡지
MEDICAL JOURNAL OF CHINESE PEOPLE'S LIBERATION ARMY
2003年
3期
266-267
,共2页
韩焕兴%陆慧琦%姜波%安峰%叶伟民%曾万杰%罗荣城
韓煥興%陸慧琦%薑波%安峰%葉偉民%曾萬傑%囉榮城
한환흥%륙혜기%강파%안봉%협위민%증만걸%라영성
生物工程抗HBsFab%亲合纯化%Ni-NTA离子螯合纯化%SDS-PAGE
生物工程抗HBsFab%親閤純化%Ni-NTA離子螯閤純化%SDS-PAGE
생물공정항HBsFab%친합순화%Ni-NTA리자오합순화%SDS-PAGE
比较3种不同纯化体系纯化生物工程抗-HBsFab的效率和效果,寻求高效、经济的生物工程产品批量纯化方法.采用增菌发酵抗-HBsFab阳性克隆,超声破菌法制备Fab上清.分别缓冲平衡抗Fab-Sepharose亲合胶、链球菌蛋白G(prot.G)-Sepharose胶和Ni-NTA离子螯合胶,对Fab上清进行过柱纯化.紫外光检测目的蛋白得率,SDS-PAGE鉴定产物的纯度并用HBsAg包被ELISA检测其生物活性.结果显示,等容积不同类别的胶体对目的蛋白的纯化效率依次为:Ni-NTA离子螯合胶prot.G-Sepharose胶＞抗-Fab-Sepharose亲合胶;在各胶体饱和结合能力之内,3种方法皆可获高纯度产品,在SDS-PAGE中呈现单一区带;HBsAg包被ELISA检测结果为3种方法纯化制备的Fab在抗原结合能力上未显示明显差别.提示,3种纯化方法各有优势和应用限制,Ni-NTA法在经济性、实用性和纯化效率上明显优于其他两种方法.
比較3種不同純化體繫純化生物工程抗-HBsFab的效率和效果,尋求高效、經濟的生物工程產品批量純化方法.採用增菌髮酵抗-HBsFab暘性剋隆,超聲破菌法製備Fab上清.分彆緩遲平衡抗Fab-Sepharose親閤膠、鏈毬菌蛋白G(prot.G)-Sepharose膠和Ni-NTA離子螯閤膠,對Fab上清進行過柱純化.紫外光檢測目的蛋白得率,SDS-PAGE鑒定產物的純度併用HBsAg包被ELISA檢測其生物活性.結果顯示,等容積不同類彆的膠體對目的蛋白的純化效率依次為:Ni-NTA離子螯閤膠prot.G-Sepharose膠＞抗-Fab-Sepharose親閤膠;在各膠體飽和結閤能力之內,3種方法皆可穫高純度產品,在SDS-PAGE中呈現單一區帶;HBsAg包被ELISA檢測結果為3種方法純化製備的Fab在抗原結閤能力上未顯示明顯差彆.提示,3種純化方法各有優勢和應用限製,Ni-NTA法在經濟性、實用性和純化效率上明顯優于其他兩種方法.
비교3충불동순화체계순화생물공정항-HBsFab적효솔화효과,심구고효、경제적생물공정산품비량순화방법.채용증균발효항-HBsFab양성극륭,초성파균법제비Fab상청.분별완충평형항Fab-Sepharose친합효、련구균단백G(prot.G)-Sepharose효화Ni-NTA리자오합효,대Fab상청진행과주순화.자외광검측목적단백득솔,SDS-PAGE감정산물적순도병용HBsAg포피ELISA검측기생물활성.결과현시,등용적불동유별적효체대목적단백적순화효솔의차위:Ni-NTA리자오합효prot.G-Sepharose효＞항-Fab-Sepharose친합효;재각효체포화결합능력지내,3충방법개가획고순도산품,재SDS-PAGE중정현단일구대;HBsAg포피ELISA검측결과위3충방법순화제비적Fab재항원결합능력상미현시명현차별.제시,3충순화방법각유우세화응용한제,Ni-NTA법재경제성、실용성화순화효솔상명현우우기타량충방법.
