北京农学院学报
北京農學院學報
북경농학원학보
JOURNAL OF BEIJING AGRICULTURAL COLLEGE
2001年
4期
6-8
,共3页
胡学军%徐红梅%赵东利%李晶泉%袁晓东
鬍學軍%徐紅梅%趙東利%李晶泉%袁曉東
호학군%서홍매%조동리%리정천%원효동
T-vector%pUC118%PCR产物%限制酶Eam1105I
T-vector%pUC118%PCR產物%限製酶Eam1105I
T-vector%pUC118%PCR산물%한제매Eam1105I
本文描述了一种构建与PCR产物直接连接的克隆载体的方法.以高拷贝克隆载体pUC118为骨架载体,在pUC118质粒Ampr基因的Eam1105I酶切位点上,以点突变的方式封闭Eam1105I酶切位点.经转化大肠杆菌JM109证实,该改造过的pUC118质粒,可使宿主细胞具有氨苄抗性,仍可作为氨苄选择标记的克隆载体.将一人工合成的具有两个Eam1105I酶切位点的互补寡聚核苷酸链(两端具有BamHI接头)插入已封闭Eam1105I酶切位点的pUC118*载体的BamHI位点,构成新的克隆载体,此质粒命名为pUC118E.该载体经Eam1105I酶切后,可产生3'端突出一个T碱基的T-vector,能与PCR产物直接连接.
本文描述瞭一種構建與PCR產物直接連接的剋隆載體的方法.以高拷貝剋隆載體pUC118為骨架載體,在pUC118質粒Ampr基因的Eam1105I酶切位點上,以點突變的方式封閉Eam1105I酶切位點.經轉化大腸桿菌JM109證實,該改造過的pUC118質粒,可使宿主細胞具有氨芐抗性,仍可作為氨芐選擇標記的剋隆載體.將一人工閤成的具有兩箇Eam1105I酶切位點的互補寡聚覈苷痠鏈(兩耑具有BamHI接頭)插入已封閉Eam1105I酶切位點的pUC118*載體的BamHI位點,構成新的剋隆載體,此質粒命名為pUC118E.該載體經Eam1105I酶切後,可產生3'耑突齣一箇T堿基的T-vector,能與PCR產物直接連接.
본문묘술료일충구건여PCR산물직접련접적극륭재체적방법.이고고패극륭재체pUC118위골가재체,재pUC118질립Ampr기인적Eam1105I매절위점상,이점돌변적방식봉폐Eam1105I매절위점.경전화대장간균JM109증실,해개조과적pUC118질립,가사숙주세포구유안변항성,잉가작위안변선택표기적극륭재체.장일인공합성적구유량개Eam1105I매절위점적호보과취핵감산련(량단구유BamHI접두)삽입이봉폐Eam1105I매절위점적pUC118*재체적BamHI위점,구성신적극륭재체,차질립명명위pUC118E.해재체경Eam1105I매절후,가산생3'단돌출일개T감기적T-vector,능여PCR산물직접련접.
