昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2001年
3期
282-289
,共8页
棉铃虫%类胰蛋白酶%苏云金杆菌%降解
棉鈴蟲%類胰蛋白酶%囌雲金桿菌%降解
면령충%류이단백매%소운금간균%강해
将棉铃虫Helicoverpa armigera中肠液经Sephadex G-75、 DEAE-Sephadex A-50阴离子交换和CM-Sephadex C-50阳离子交换柱层析进行分离纯化,得到部分纯化的24.5 kD蛋白.该蛋白可以水解胰蛋白酶的专性底物BApNA和TAME,不能水解胰凝乳蛋白酶的专性底物BTEE.蛋白酶抑制剂的抑制试验显示,TLCK、PMSF、STI及SBBI均可显著抑制该蛋白对BApNA的水解作用,而TPCK无抑制作用.由此推断,24.5 kD蛋白是棉铃虫的类胰蛋白酶.以BApNA为底物,类胰蛋白酶的最适pH为10.5～11.0.Sephadex G-75分离得到了4个洗脱峰,电泳结果显示,各洗脱峰均能使苏云金杆菌库斯塔克变种Bacillus thuringiensis var. kurstaki HD-1原毒素降解为60.5 kD的活力片段.峰Ⅳ虽然不能水解BApNA和TAME,但仍可对原毒素进行降解.而类胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已将60.5kD蛋白完全降解,当减小用量至1/3时,才出现60.5 kD蛋白.因此,苏云金杆菌δ-内毒素在棉铃虫中肠内的降解有多种蛋白酶参与,类胰蛋白酶在其中起重要作用.CM-Sephadex C-50进一步分离得到的类胰蛋白酶可对原毒素进行降解,其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的显著抑制,不受TPCK的影响.
將棉鈴蟲Helicoverpa armigera中腸液經Sephadex G-75、 DEAE-Sephadex A-50陰離子交換和CM-Sephadex C-50暘離子交換柱層析進行分離純化,得到部分純化的24.5 kD蛋白.該蛋白可以水解胰蛋白酶的專性底物BApNA和TAME,不能水解胰凝乳蛋白酶的專性底物BTEE.蛋白酶抑製劑的抑製試驗顯示,TLCK、PMSF、STI及SBBI均可顯著抑製該蛋白對BApNA的水解作用,而TPCK無抑製作用.由此推斷,24.5 kD蛋白是棉鈴蟲的類胰蛋白酶.以BApNA為底物,類胰蛋白酶的最適pH為10.5～11.0.Sephadex G-75分離得到瞭4箇洗脫峰,電泳結果顯示,各洗脫峰均能使囌雲金桿菌庫斯塔剋變種Bacillus thuringiensis var. kurstaki HD-1原毒素降解為60.5 kD的活力片段.峰Ⅳ雖然不能水解BApNA和TAME,但仍可對原毒素進行降解.而類胰蛋白酶活力最高的峰Ⅱ已將60.5kD蛋白完全降解,噹減小用量至1/3時,纔齣現60.5 kD蛋白.因此,囌雲金桿菌δ-內毒素在棉鈴蟲中腸內的降解有多種蛋白酶參與,類胰蛋白酶在其中起重要作用.CM-Sephadex C-50進一步分離得到的類胰蛋白酶可對原毒素進行降解,其降解作用受到TLCK、PMSF、STI及SBBI的顯著抑製,不受TPCK的影響.
장면령충Helicoverpa armigera중장액경Sephadex G-75、 DEAE-Sephadex A-50음리자교환화CM-Sephadex C-50양리자교환주층석진행분리순화,득도부분순화적24.5 kD단백.해단백가이수해이단백매적전성저물BApNA화TAME,불능수해이응유단백매적전성저물BTEE.단백매억제제적억제시험현시,TLCK、PMSF、STI급SBBI균가현저억제해단백대BApNA적수해작용,이TPCK무억제작용.유차추단,24.5 kD단백시면령충적류이단백매.이BApNA위저물,류이단백매적최괄pH위10.5～11.0.Sephadex G-75분리득도료4개세탈봉,전영결과현시,각세탈봉균능사소운금간균고사탑극변충Bacillus thuringiensis var. kurstaki HD-1원독소강해위60.5 kD적활력편단.봉Ⅳ수연불능수해BApNA화TAME,단잉가대원독소진행강해.이류이단백매활력최고적봉Ⅱ이장60.5kD단백완전강해,당감소용량지1/3시,재출현60.5 kD단백.인차,소운금간균δ-내독소재면령충중장내적강해유다충단백매삼여,류이단백매재기중기중요작용.CM-Sephadex C-50진일보분리득도적류이단백매가대원독소진행강해,기강해작용수도TLCK、PMSF、STI급SBBI적현저억제,불수TPCK적영향.
