辐射研究与辐射工艺学报
輻射研究與輻射工藝學報
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JOURNAL OF RADIATION RESEARCH AND RADIATION PROCESSING
2000年
3期
193-197
,共5页
王明锁%杜泽吉%孔向蓉%苏燎原
王明鎖%杜澤吉%孔嚮蓉%囌燎原
왕명쇄%두택길%공향용%소료원
抗辐射菌%lexA基因%基因克隆%基因表达
抗輻射菌%lexA基因%基因剋隆%基因錶達
항복사균%lexA기인%기인극륭%기인표체
研究了旨在克隆抗辐射菌Deinococcus radiodurans的lexA基因并构建其表达载体,以便进一步研究lexA基因的功能及其在辐射抗性中的作用.主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基因组DNA,分离出lexA基因并测定其序列,克隆于质粒载体PUC19,用电击穿孔法将重组的质粒导入大肠杆菌JM109,SDS-PAGE检测基因的表达.用定点突变技术,改变lexA基因核糖体结合位点(RBS),以增强lexA基因的表达.结果表明,lexA基因位于基因组DNA的BlnI-AscI片断中,由630个碱基对(bp)组成,编码210个氨基酸(aa),理论上推定,分子量为22.5kD,等电点为6.4.用pUC19构建的lexA基因表达载体能在大肠杆菌JM109中表达,但表达效率低,改变lexA的核糖体结合位点RBS可提高该基因表达水平,使进一步分离纯化lexA蛋白质以及深入研究该基因的作用成为可能.
研究瞭旨在剋隆抗輻射菌Deinococcus radiodurans的lexA基因併構建其錶達載體,以便進一步研究lexA基因的功能及其在輻射抗性中的作用.主要的實驗步驟包括分離提取抗輻射菌基因組DNA,分離齣lexA基因併測定其序列,剋隆于質粒載體PUC19,用電擊穿孔法將重組的質粒導入大腸桿菌JM109,SDS-PAGE檢測基因的錶達.用定點突變技術,改變lexA基因覈糖體結閤位點(RBS),以增彊lexA基因的錶達.結果錶明,lexA基因位于基因組DNA的BlnI-AscI片斷中,由630箇堿基對(bp)組成,編碼210箇氨基痠(aa),理論上推定,分子量為22.5kD,等電點為6.4.用pUC19構建的lexA基因錶達載體能在大腸桿菌JM109中錶達,但錶達效率低,改變lexA的覈糖體結閤位點RBS可提高該基因錶達水平,使進一步分離純化lexA蛋白質以及深入研究該基因的作用成為可能.
연구료지재극륭항복사균Deinococcus radiodurans적lexA기인병구건기표체재체,이편진일보연구lexA기인적공능급기재복사항성중적작용.주요적실험보취포괄분리제취항복사균기인조DNA,분리출lexA기인병측정기서렬,극륭우질립재체PUC19,용전격천공법장중조적질립도입대장간균JM109,SDS-PAGE검측기인적표체.용정점돌변기술,개변lexA기인핵당체결합위점(RBS),이증강lexA기인적표체.결과표명,lexA기인위우기인조DNA적BlnI-AscI편단중,유630개감기대(bp)조성,편마210개안기산(aa),이론상추정,분자량위22.5kD,등전점위6.4.용pUC19구건적lexA기인표체재체능재대장간균JM109중표체,단표체효솔저,개변lexA적핵당체결합위점RBS가제고해기인표체수평,사진일보분리순화lexA단백질이급심입연구해기인적작용성위가능.
