中国医学科学院学报
中國醫學科學院學報
중국의학과학원학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE SINICAE
2003年
2期
117-121
,共5页
沈伟%黄粤%唐毅%刘德培%刘光%吴敏%梁植权
瀋偉%黃粵%唐毅%劉德培%劉光%吳敏%樑植權
침위%황월%당의%류덕배%류광%오민%량식권
细菌人工染色体%同源重组β珠蛋白%基因簇%转基因小鼠
細菌人工染色體%同源重組β珠蛋白%基因簇%轉基因小鼠
세균인공염색체%동원중조β주단백%기인족%전기인소서
目的利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,修饰含全长人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受体α链基因的BAC(细菌人工染色体)克隆,建立只包括全长人β珠蛋白基因簇的转基因鼠模型.方法分别在待删除片段上、下游用PCR合成500bp左右的两段同源序列,共同克隆入构建载体pBV的HindⅢ和Xba Ⅰ位点之间,然后以 Sal Ⅰ酶切后将此1 kb的插入片段再克隆入温度敏感型穿梭载体pSV-RecA中,转化含B5-BAC DNA的感受态大肠杆菌DH10B,经氯霉素正筛选和镰孢菌酸(FA)负筛选,获得发生两次同源重组后只含修饰后的BACDNA 而穿梭载体已丢失的菌株.经脉冲场凝胶电泳鉴定后,纯化修饰的BAC DNA,经显微注射受精卵制备转基因鼠,分析其中的人β珠蛋白基因簇整合和表达状况.结果利用RecA蛋白介导的同源重组的方法,获得了IL-11受体α链基因被定位删除的含完整人β珠蛋白基因簇的BAC克隆(命名为βD-BAC),建立了 3株独立的转基因鼠株系.结论新的BAC介导的转基因鼠中的人β珠蛋白基因簇显示正确的表达模式和水平.
目的利用RecA蛋白介導的同源重組的方法,脩飾含全長人β珠蛋白基因簇及一段IL-11受體α鏈基因的BAC(細菌人工染色體)剋隆,建立隻包括全長人β珠蛋白基因簇的轉基因鼠模型.方法分彆在待刪除片段上、下遊用PCR閤成500bp左右的兩段同源序列,共同剋隆入構建載體pBV的HindⅢ和Xba Ⅰ位點之間,然後以 Sal Ⅰ酶切後將此1 kb的插入片段再剋隆入溫度敏感型穿梭載體pSV-RecA中,轉化含B5-BAC DNA的感受態大腸桿菌DH10B,經氯黴素正篩選和鐮孢菌痠(FA)負篩選,穫得髮生兩次同源重組後隻含脩飾後的BACDNA 而穿梭載體已丟失的菌株.經脈遲場凝膠電泳鑒定後,純化脩飾的BAC DNA,經顯微註射受精卵製備轉基因鼠,分析其中的人β珠蛋白基因簇整閤和錶達狀況.結果利用RecA蛋白介導的同源重組的方法,穫得瞭IL-11受體α鏈基因被定位刪除的含完整人β珠蛋白基因簇的BAC剋隆(命名為βD-BAC),建立瞭 3株獨立的轉基因鼠株繫.結論新的BAC介導的轉基因鼠中的人β珠蛋白基因簇顯示正確的錶達模式和水平.
목적이용RecA단백개도적동원중조적방법,수식함전장인β주단백기인족급일단IL-11수체α련기인적BAC(세균인공염색체)극륭,건립지포괄전장인β주단백기인족적전기인서모형.방법분별재대산제편단상、하유용PCR합성500bp좌우적량단동원서렬,공동극륭입구건재체pBV적HindⅢ화Xba Ⅰ위점지간,연후이 Sal Ⅰ매절후장차1 kb적삽입편단재극륭입온도민감형천사재체pSV-RecA중,전화함B5-BAC DNA적감수태대장간균DH10B,경록매소정사선화렴포균산(FA)부사선,획득발생량차동원중조후지함수식후적BACDNA 이천사재체이주실적균주.경맥충장응효전영감정후,순화수식적BAC DNA,경현미주사수정란제비전기인서,분석기중적인β주단백기인족정합화표체상황.결과이용RecA단백개도적동원중조적방법,획득료IL-11수체α련기인피정위산제적함완정인β주단백기인족적BAC극륭(명명위βD-BAC),건립료 3주독립적전기인서주계.결론신적BAC개도적전기인서중적인β주단백기인족현시정학적표체모식화수평.
