第一军医大学学报
第一軍醫大學學報
제일군의대학학보
JOURNAL OF FIRST MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
5期
413-416
,共4页
熊绍虎%余磊%谭海燕%黄涛%王朝阳%刘大庸%钟世镇
熊紹虎%餘磊%譚海燕%黃濤%王朝暘%劉大庸%鐘世鎮
웅소호%여뢰%담해연%황도%왕조양%류대용%종세진
骨形态发生蛋白-2%大肠杆菌%基因工程
骨形態髮生蛋白-2%大腸桿菌%基因工程
골형태발생단백-2%대장간균%기인공정
目的用基因工程技术在大肠杆菌中表达人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2).方法 hBMP-2原核表达载体pYR(pBV220-hBMP-2)转化Ecoli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化状态以及诱导时间与目的蛋白表达率的关系.离子交换层析DEAE和分子筛S-300纯化重组蛋白,自然缓降复性法对其复性.结果 SDS-PAGE显示在相对分子质量约为13 000时出现明显外源蛋白表达带,而且当工程菌30℃活化至D600约为0.45时,其表达效率较高;在此状态下,温度诱导表达4 h,目的蛋白表达量最高,以后随着时间的延长,表达量稍下降.重组蛋白经纯化后植入小鼠肌肉,组织学观察到肌肉内大量间充质细胞增生以及软骨与骨形成.结论重组hBMP-2具有良好异位成骨活性.
目的用基因工程技術在大腸桿菌中錶達人骨形態髮生蛋白-2(hBMP-2).方法 hBMP-2原覈錶達載體pYR(pBV220-hBMP-2)轉化Ecoli BL21,SDS-PAGE分析工程菌活化狀態以及誘導時間與目的蛋白錶達率的關繫.離子交換層析DEAE和分子篩S-300純化重組蛋白,自然緩降複性法對其複性.結果 SDS-PAGE顯示在相對分子質量約為13 000時齣現明顯外源蛋白錶達帶,而且噹工程菌30℃活化至D600約為0.45時,其錶達效率較高;在此狀態下,溫度誘導錶達4 h,目的蛋白錶達量最高,以後隨著時間的延長,錶達量稍下降.重組蛋白經純化後植入小鼠肌肉,組織學觀察到肌肉內大量間充質細胞增生以及軟骨與骨形成.結論重組hBMP-2具有良好異位成骨活性.
목적용기인공정기술재대장간균중표체인골형태발생단백-2(hBMP-2).방법 hBMP-2원핵표체재체pYR(pBV220-hBMP-2)전화Ecoli BL21,SDS-PAGE분석공정균활화상태이급유도시간여목적단백표체솔적관계.리자교환층석DEAE화분자사S-300순화중조단백,자연완강복성법대기복성.결과 SDS-PAGE현시재상대분자질량약위13 000시출현명현외원단백표체대,이차당공정균30℃활화지D600약위0.45시,기표체효솔교고;재차상태하,온도유도표체4 h,목적단백표체량최고,이후수착시간적연장,표체량초하강.중조단백경순화후식입소서기육,조직학관찰도기육내대량간충질세포증생이급연골여골형성.결론중조hBMP-2구유량호이위성골활성.
