中国病毒学
中國病毒學
중국병독학
VIROLOGICA SINICA
2002年
4期
319-325
,共7页
王汉中%黄弋%司艳红%方明刚%陈新文%Just M.Vlak%胡志红
王漢中%黃弋%司豔紅%方明剛%陳新文%Just M.Vlak%鬍誌紅
왕한중%황익%사염홍%방명강%진신문%Just M.Vlak%호지홍
HaSNPV%表达%转位%细菌人造染色体
HaSNPV%錶達%轉位%細菌人造染色體
HaSNPV%표체%전위%세균인조염색체
将含有低拷贝数的mini-F replicon、一个卡那霉素抗性基因和一个lacZα基因8.6kb的DNA片段经同源重组置换到棉铃虫核型多角体病毒基因组中的多角体蛋白基因内,构建了既能在E.coli内复制又可在昆虫细胞内复制形成完整的病毒粒子棉铃虫核型多角体病毒Bacmid(HaBacmid-HZ8).另外将HaSNPV的多角体蛋白基因和P10启动子序列取代pFastBacDual质粒上的AcMNPV的多角体启动子序列和P10启动子序列,构建插入HaSNPV多角体蛋白基因和 P10启动子序列的HapFastBacPhP10供体质粒.利用HapFastBacPhP10供体质粒将eGFP基因转位至HZ8的Tn7附着位点上,随后将含有eGFP基因的重组HaBacmid DNA转染至HZAm1细胞内.转染5d后,细胞核内能形成典型的多角体,在萤光显微镜下观察到细胞内显示出强烈的绿色萤光.结果证明我们构建的HaBac to Bcac 表达系统能有效的表达外源基因.
將含有低拷貝數的mini-F replicon、一箇卡那黴素抗性基因和一箇lacZα基因8.6kb的DNA片段經同源重組置換到棉鈴蟲覈型多角體病毒基因組中的多角體蛋白基因內,構建瞭既能在E.coli內複製又可在昆蟲細胞內複製形成完整的病毒粒子棉鈴蟲覈型多角體病毒Bacmid(HaBacmid-HZ8).另外將HaSNPV的多角體蛋白基因和P10啟動子序列取代pFastBacDual質粒上的AcMNPV的多角體啟動子序列和P10啟動子序列,構建插入HaSNPV多角體蛋白基因和 P10啟動子序列的HapFastBacPhP10供體質粒.利用HapFastBacPhP10供體質粒將eGFP基因轉位至HZ8的Tn7附著位點上,隨後將含有eGFP基因的重組HaBacmid DNA轉染至HZAm1細胞內.轉染5d後,細胞覈內能形成典型的多角體,在螢光顯微鏡下觀察到細胞內顯示齣彊烈的綠色螢光.結果證明我們構建的HaBac to Bcac 錶達繫統能有效的錶達外源基因.
장함유저고패수적mini-F replicon、일개잡나매소항성기인화일개lacZα기인8.6kb적DNA편단경동원중조치환도면령충핵형다각체병독기인조중적다각체단백기인내,구건료기능재E.coli내복제우가재곤충세포내복제형성완정적병독입자면령충핵형다각체병독Bacmid(HaBacmid-HZ8).령외장HaSNPV적다각체단백기인화P10계동자서렬취대pFastBacDual질립상적AcMNPV적다각체계동자서렬화P10계동자서렬,구건삽입HaSNPV다각체단백기인화 P10계동자서렬적HapFastBacPhP10공체질립.이용HapFastBacPhP10공체질립장eGFP기인전위지HZ8적Tn7부착위점상,수후장함유eGFP기인적중조HaBacmid DNA전염지HZAm1세포내.전염5d후,세포핵내능형성전형적다각체,재형광현미경하관찰도세포내현시출강렬적록색형광.결과증명아문구건적HaBac to Bcac 표체계통능유효적표체외원기인.
