军事医学科学院院刊
軍事醫學科學院院刊
군사의학과학원원간
BULLETIN OF THE ACADEMY OF MILITARY MEDICAL SCIENCES
2002年
2期
105-108
,共4页
何竞%常国辉%吴劲松%李钟铎%祝庆余
何競%常國輝%吳勁鬆%李鐘鐸%祝慶餘
하경%상국휘%오경송%리종탁%축경여
东部马脑炎病毒%E2基因%克隆%表达%印迹法,蛋白质%酶联免疫吸附测定
東部馬腦炎病毒%E2基因%剋隆%錶達%印跡法,蛋白質%酶聯免疫吸附測定
동부마뇌염병독%E2기인%극륭%표체%인적법,단백질%매련면역흡부측정
目的:克隆表达东部马脑炎病毒(eastern equine encephalomyelitis virus,EEEV)E2基因HT5"H 方法:由病毒感染的鼠脑制备总RNA,利用RT_PCREEEV E2?pGEM_T easy载体E2基因克隆至谷胱甘肽转移酶(GST)融合表达载体pGEX_5x_2中±Western blotting)和ELISA法分HT5"H 结果:经过RT_PCRE2基因片段的序列是正确的,并且在原核载体中得到表达,目的蛋白占总菌体蛋白的24.5%,主要以包涵体形式存在.WesternóGST_E2Triton X_100,1*!mol/L和2*!mol/L尿素E2融合蛋白作为包被抗原初步建立了间接ELISA法,结果表明与兔抗EEEV血清起特异反应,但与兔抗WEEV血清无交叉反应.结论:东方马脑炎病毒的E2基因在大肠杆菌中得到稳定表达,表达的GST_E2EEEV E2μEEEV基因工程诊断试剂奠定了基础.
目的:剋隆錶達東部馬腦炎病毒(eastern equine encephalomyelitis virus,EEEV)E2基因HT5"H 方法:由病毒感染的鼠腦製備總RNA,利用RT_PCREEEV E2?pGEM_T easy載體E2基因剋隆至穀胱甘肽轉移酶(GST)融閤錶達載體pGEX_5x_2中±Western blotting)和ELISA法分HT5"H 結果:經過RT_PCRE2基因片段的序列是正確的,併且在原覈載體中得到錶達,目的蛋白佔總菌體蛋白的24.5%,主要以包涵體形式存在.WesternóGST_E2Triton X_100,1*!mol/L和2*!mol/L尿素E2融閤蛋白作為包被抗原初步建立瞭間接ELISA法,結果錶明與兔抗EEEV血清起特異反應,但與兔抗WEEV血清無交扠反應.結論:東方馬腦炎病毒的E2基因在大腸桿菌中得到穩定錶達,錶達的GST_E2EEEV E2μEEEV基因工程診斷試劑奠定瞭基礎.
목적:극륭표체동부마뇌염병독(eastern equine encephalomyelitis virus,EEEV)E2기인HT5"H 방법:유병독감염적서뇌제비총RNA,이용RT_PCREEEV E2?pGEM_T easy재체E2기인극륭지곡광감태전이매(GST)융합표체재체pGEX_5x_2중±Western blotting)화ELISA법분HT5"H 결과:경과RT_PCRE2기인편단적서렬시정학적,병차재원핵재체중득도표체,목적단백점총균체단백적24.5%,주요이포함체형식존재.WesternóGST_E2Triton X_100,1*!mol/L화2*!mol/L뇨소E2융합단백작위포피항원초보건립료간접ELISA법,결과표명여토항EEEV혈청기특이반응,단여토항WEEV혈청무교차반응.결론:동방마뇌염병독적E2기인재대장간균중득도은정표체,표체적GST_E2EEEV E2μEEEV기인공정진단시제전정료기출.
