第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2002年
2期
122-125
,共4页
符伟军%黄君健%白云秀%严友农%徐兵%邵国兴%王禾%黄翠芬
符偉軍%黃君健%白雲秀%嚴友農%徐兵%邵國興%王禾%黃翠芬
부위군%황군건%백운수%엄우농%서병%소국흥%왕화%황취분
膀胱肿瘤%端粒,末端转移酶%转染%hTERT
膀胱腫瘤%耑粒,末耑轉移酶%轉染%hTERT
방광종류%단립,말단전이매%전염%hTERT
目的构建端粒酶逆转录酶基因(hTERT)缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT,并转入膀胱癌细胞株T24中,观察其稳定表达. 探讨其对端粒酶活性调控机制及成为膀胱肿瘤基因治疗新靶点的可能性. 方法将PCR扩增的hTERT缺失突变体片段用 EcoRI与SalI酶切,并连接到真核表达载体pEGFP-C1上, 构建成hTERT缺失突变的真核表达载体pEGFP-hTERT;利用DNA-磷酸钙共沉淀法将pEGFP-hTERT导入膀胱癌细胞株T24中,应用荧光显微镜、与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色等方法观察转染细胞中hTERT-GFP融合蛋白定位表达及对膀胱癌细胞生长的影响. 结果酶切鉴定证实hTERT缺失突变体已克隆到pEGFP-C1的EcoRI与SalI位点之间,在转染细胞中观察到与其融合的绿色荧光蛋白的稳定表达,定位于细胞核内;转染细胞2 wk后与衰老相关β-半乳糖苷酶表达增加,细胞生长受抑制. 结论构建的端粒酶逆转录酶基因hTERT缺失突变真核表达载体pEG FP-hTERT可在膀胱癌细胞T24中稳定表达. 突变型hTERT蛋白可入细胞核中竞争性影响端粒酶的功能,进而抑制膀胱癌细胞的生长.
目的構建耑粒酶逆轉錄酶基因(hTERT)缺失突變的真覈錶達載體pEGFP-hTERT,併轉入膀胱癌細胞株T24中,觀察其穩定錶達. 探討其對耑粒酶活性調控機製及成為膀胱腫瘤基因治療新靶點的可能性. 方法將PCR擴增的hTERT缺失突變體片段用 EcoRI與SalI酶切,併連接到真覈錶達載體pEGFP-C1上, 構建成hTERT缺失突變的真覈錶達載體pEGFP-hTERT;利用DNA-燐痠鈣共沉澱法將pEGFP-hTERT導入膀胱癌細胞株T24中,應用熒光顯微鏡、與衰老相關的β-半乳糖苷酶染色等方法觀察轉染細胞中hTERT-GFP融閤蛋白定位錶達及對膀胱癌細胞生長的影響. 結果酶切鑒定證實hTERT缺失突變體已剋隆到pEGFP-C1的EcoRI與SalI位點之間,在轉染細胞中觀察到與其融閤的綠色熒光蛋白的穩定錶達,定位于細胞覈內;轉染細胞2 wk後與衰老相關β-半乳糖苷酶錶達增加,細胞生長受抑製. 結論構建的耑粒酶逆轉錄酶基因hTERT缺失突變真覈錶達載體pEG FP-hTERT可在膀胱癌細胞T24中穩定錶達. 突變型hTERT蛋白可入細胞覈中競爭性影響耑粒酶的功能,進而抑製膀胱癌細胞的生長.
목적구건단립매역전록매기인(hTERT)결실돌변적진핵표체재체pEGFP-hTERT,병전입방광암세포주T24중,관찰기은정표체. 탐토기대단립매활성조공궤제급성위방광종류기인치료신파점적가능성. 방법장PCR확증적hTERT결실돌변체편단용 EcoRI여SalI매절,병련접도진핵표체재체pEGFP-C1상, 구건성hTERT결실돌변적진핵표체재체pEGFP-hTERT;이용DNA-린산개공침정법장pEGFP-hTERT도입방광암세포주T24중,응용형광현미경、여쇠로상관적β-반유당감매염색등방법관찰전염세포중hTERT-GFP융합단백정위표체급대방광암세포생장적영향. 결과매절감정증실hTERT결실돌변체이극륭도pEGFP-C1적EcoRI여SalI위점지간,재전염세포중관찰도여기융합적록색형광단백적은정표체,정위우세포핵내;전염세포2 wk후여쇠로상관β-반유당감매표체증가,세포생장수억제. 결론구건적단립매역전록매기인hTERT결실돌변진핵표체재체pEG FP-hTERT가재방광암세포T24중은정표체. 돌변형hTERT단백가입세포핵중경쟁성영향단립매적공능,진이억제방광암세포적생장.
