华东理工大学学报(自然科学版)
華東理工大學學報(自然科學版)
화동리공대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF EAST CHINA UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY
2002年
1期
39-42,62
,共5页
范立强%贺华君%袁勤生%杨冠珍%吴祥甫
範立彊%賀華君%袁勤生%楊冠珍%吳祥甫
범립강%하화군%원근생%양관진%오상보
EC-SOD%大肠杆菌%昆虫杆状病毒%基因克隆%基因表达%SOD
EC-SOD%大腸桿菌%昆蟲桿狀病毒%基因剋隆%基因錶達%SOD
EC-SOD%대장간균%곤충간상병독%기인극륭%기인표체%SOD
将编码人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)成熟肽的cDNA插入含T7启动子的质粒pET-28a(+)中构建表达质粒pET-EC-SOD,表达菌株用1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达3h～5h后,产生较多的重组人EC-SOD,并形成包含体.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表明,表达的重组蛋白占菌体可溶性蛋白质的26%以上.经纯化和复性后的EC-SOD比活为每毫克纯化酶蛋白1 200U.将EC-SOD cDNA基因插入昆虫杆状病毒供体质粒pFastBacHTb中,重组杆状病毒BacHT-EC-SOD转染粉纹夜蛾Tn-5Bl-4细胞,经扩增后在细胞内进行表达.SDS-PAGE分析结果表明,粉纹夜蛾细胞中表达一相对分子质量约为28ku的特异蛋白质带,Western blot分析表明,该特异条带即为EC-SOD蛋白,连苯三酚自氧化法测得表达产物比活为每毫克细胞裂解物260U.
將編碼人胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)成熟肽的cDNA插入含T7啟動子的質粒pET-28a(+)中構建錶達質粒pET-EC-SOD,錶達菌株用1mmol/L異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導錶達3h～5h後,產生較多的重組人EC-SOD,併形成包含體.SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析錶明,錶達的重組蛋白佔菌體可溶性蛋白質的26%以上.經純化和複性後的EC-SOD比活為每毫剋純化酶蛋白1 200U.將EC-SOD cDNA基因插入昆蟲桿狀病毒供體質粒pFastBacHTb中,重組桿狀病毒BacHT-EC-SOD轉染粉紋夜蛾Tn-5Bl-4細胞,經擴增後在細胞內進行錶達.SDS-PAGE分析結果錶明,粉紋夜蛾細胞中錶達一相對分子質量約為28ku的特異蛋白質帶,Western blot分析錶明,該特異條帶即為EC-SOD蛋白,連苯三酚自氧化法測得錶達產物比活為每毫剋細胞裂解物260U.
장편마인포외초양화물기화매(EC-SOD)성숙태적cDNA삽입함T7계동자적질립pET-28a(+)중구건표체질립pET-EC-SOD,표체균주용1mmol/L이병기류대-β-D-반유당감(IPTG)유도표체3h～5h후,산생교다적중조인EC-SOD,병형성포함체.SDS-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)분석표명,표체적중조단백점균체가용성단백질적26%이상.경순화화복성후적EC-SOD비활위매호극순화매단백1 200U.장EC-SOD cDNA기인삽입곤충간상병독공체질립pFastBacHTb중,중조간상병독BacHT-EC-SOD전염분문야아Tn-5Bl-4세포,경확증후재세포내진행표체.SDS-PAGE분석결과표명,분문야아세포중표체일상대분자질량약위28ku적특이단백질대,Western blot분석표명,해특이조대즉위EC-SOD단백,련분삼분자양화법측득표체산물비활위매호극세포렬해물260U.
