生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2004年
5期
800-804
,共5页
邓宁%向军俭%陈文吟%熊盛%王珣章%粟宽源
鄧寧%嚮軍儉%陳文吟%熊盛%王珣章%粟寬源
산저%향군검%진문음%웅성%왕순장%속관원
HBsAg%重组Fab%发酵%毕赤酵母
HBsAg%重組Fab%髮酵%畢赤酵母
HBsAg%중조Fab%발효%필적효모
为了适应工业生产的需要,利用fed-batch方法,重组人源性抗HBsAg Fab抗体酵母工程菌在30L发酵罐中进行了高密度发酵,发酵最适温度30℃,pH值范围5.0～5.3,溶氧范围20%～30%.发酵液OD600值达到300时开始诱导,甲醇最佳诱导浓度为10 mL/L.重组人源性抗HBsAg Fab抗体经离子交换层析纯化,纯化产品经SDSPAGE、Western blot进行分析和ELISA方法进行活性测定.结果显示,重组Fab抗体在Fed-batch发酵系统中可高效表达,经过192 h的发酵生产,重组人源性抗HBsAg Fab抗体的表达量可达412mg/L.发酵上清经过离子交换层析纯化,获得纯度为95%的重组Fab抗体,该Fab抗体经ELISA分析具有较高的HBsAg抗原亲和力和特异性.结果证实可以通过高密度发酵毕赤酵母工程菌来高效生产重组人源性抗HBsAg Fab抗体,为后续的工业化生产应用奠定了基础.
為瞭適應工業生產的需要,利用fed-batch方法,重組人源性抗HBsAg Fab抗體酵母工程菌在30L髮酵罐中進行瞭高密度髮酵,髮酵最適溫度30℃,pH值範圍5.0～5.3,溶氧範圍20%～30%.髮酵液OD600值達到300時開始誘導,甲醇最佳誘導濃度為10 mL/L.重組人源性抗HBsAg Fab抗體經離子交換層析純化,純化產品經SDSPAGE、Western blot進行分析和ELISA方法進行活性測定.結果顯示,重組Fab抗體在Fed-batch髮酵繫統中可高效錶達,經過192 h的髮酵生產,重組人源性抗HBsAg Fab抗體的錶達量可達412mg/L.髮酵上清經過離子交換層析純化,穫得純度為95%的重組Fab抗體,該Fab抗體經ELISA分析具有較高的HBsAg抗原親和力和特異性.結果證實可以通過高密度髮酵畢赤酵母工程菌來高效生產重組人源性抗HBsAg Fab抗體,為後續的工業化生產應用奠定瞭基礎.
위료괄응공업생산적수요,이용fed-batch방법,중조인원성항HBsAg Fab항체효모공정균재30L발효관중진행료고밀도발효,발효최괄온도30℃,pH치범위5.0～5.3,용양범위20%～30%.발효액OD600치체도300시개시유도,갑순최가유도농도위10 mL/L.중조인원성항HBsAg Fab항체경리자교환층석순화,순화산품경SDSPAGE、Western blot진행분석화ELISA방법진행활성측정.결과현시,중조Fab항체재Fed-batch발효계통중가고효표체,경과192 h적발효생산,중조인원성항HBsAg Fab항체적표체량가체412mg/L.발효상청경과리자교환층석순화,획득순도위95%적중조Fab항체,해Fab항체경ELISA분석구유교고적HBsAg항원친화력화특이성.결과증실가이통과고밀도발효필적효모공정균래고효생산중조인원성항HBsAg Fab항체,위후속적공업화생산응용전정료기출.
