中国微侵袭神经外科杂志
中國微侵襲神經外科雜誌
중국미침습신경외과잡지
CHINESE JOURNAL OF MINIMALLY INVASIVE NEUROSURGERY
2005年
6期
256-259
,共4页
程序曲%王金鹏%黄强%王爱东%董军%兰青
程序麯%王金鵬%黃彊%王愛東%董軍%蘭青
정서곡%왕금붕%황강%왕애동%동군%란청
RNA干扰%基因,cdc2蛋白激酶%逆转录病毒载体%基因沉默%神经胶质瘤
RNA榦擾%基因,cdc2蛋白激酶%逆轉錄病毒載體%基因沉默%神經膠質瘤
RNA간우%기인,cdc2단백격매%역전록병독재체%기인침묵%신경효질류
目的设计和构建cdc2基因敲低的表达siRNA的逆转录病毒重组载体.方法利用在线软件siRNA Selection Program和siDirect设计干扰cdc2基因靶序列,合成回文DNA序列,退火后克隆至线性化pSUPER质粒载体,重组质粒载体扩增、抽提后行双酶切电泳鉴定和测序分析,再转染phoenix细胞,产生逆转录病毒,并利用NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果pSUPER表达siRNA重组质粒载体经双酶切电泳鉴定和DNA测序分析,证实插入的60 bp序列与原序列一致,位置正确.pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分别为4.25×105CFU/m1和6.00×105CFU/ml.结论cdc2基因表达siRNA逆转录病毒重组载体构建成功,可为研究胶质瘤分子病因学提供有用工具.
目的設計和構建cdc2基因敲低的錶達siRNA的逆轉錄病毒重組載體.方法利用在線軟件siRNA Selection Program和siDirect設計榦擾cdc2基因靶序列,閤成迴文DNA序列,退火後剋隆至線性化pSUPER質粒載體,重組質粒載體擴增、抽提後行雙酶切電泳鑒定和測序分析,再轉染phoenix細胞,產生逆轉錄病毒,併利用NIH3T3細胞測定病毒滴度.結果pSUPER錶達siRNA重組質粒載體經雙酶切電泳鑒定和DNA測序分析,證實插入的60 bp序列與原序列一緻,位置正確.pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2病毒滴度值分彆為4.25×105CFU/m1和6.00×105CFU/ml.結論cdc2基因錶達siRNA逆轉錄病毒重組載體構建成功,可為研究膠質瘤分子病因學提供有用工具.
목적설계화구건cdc2기인고저적표체siRNA적역전록병독중조재체.방법이용재선연건siRNA Selection Program화siDirect설계간우cdc2기인파서렬,합성회문DNA서렬,퇴화후극륭지선성화pSUPER질립재체,중조질립재체확증、추제후행쌍매절전영감정화측서분석,재전염phoenix세포,산생역전록병독,병이용NIH3T3세포측정병독적도.결과pSUPER표체siRNA중조질립재체경쌍매절전영감정화DNA측서분석,증실삽입적60 bp서렬여원서렬일치,위치정학.pSUPER.retro-C1、pSUPER.retro-C2병독적도치분별위4.25×105CFU/m1화6.00×105CFU/ml.결론cdc2기인표체siRNA역전록병독중조재체구건성공,가위연구효질류분자병인학제공유용공구.
