昆虫学报
昆蟲學報
곤충학보
ACTA ENTOMOLOGICA SINICA
2006年
3期
367-372
,共6页
沈立荣%邢丽苹%张传溪%程家安
瀋立榮%邢麗蘋%張傳溪%程傢安
침립영%형려평%장전계%정가안
意大利蜜蜂%蜂毒%磷脂酶A2基因%杆状病毒-昆虫细胞系统%表达
意大利蜜蜂%蜂毒%燐脂酶A2基因%桿狀病毒-昆蟲細胞繫統%錶達
의대리밀봉%봉독%린지매A2기인%간상병독-곤충세포계통%표체
利用Bac to Bac系统将意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至转移载体pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再将其转化入含穿梭载体Bacmid的受体大肠杆菌DH10Bac中,通过转座作用,得到含AmPLA2基因的重组病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因组DNA,用脂质体介导转染粉纹夜蛾细胞Tn-5B1-4,得到重组病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重组病毒感染Tn-5B1-4细胞,在细胞中表达AmPLA2.SDS-PAGE电泳结果显示,与6×His Tag融合表达的产物蛋白分子量约为18 kD左右,表达量约占细胞总蛋白的5.35%.Western blot印迹显示,融合表达产物能与意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清发生免疫反应.生物活性测定显示,含表达产物的细胞蛋白粗提物对底物蛋黄的酶活力约为6.13 μmol·min-1·mg-1.
利用Bac to Bac繫統將意大利蜜蜂蜂毒燐脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA剋隆至轉移載體pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再將其轉化入含穿梭載體Bacmid的受體大腸桿菌DH10Bac中,通過轉座作用,得到含AmPLA2基因的重組病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因組DNA,用脂質體介導轉染粉紋夜蛾細胞Tn-5B1-4,得到重組病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重組病毒感染Tn-5B1-4細胞,在細胞中錶達AmPLA2.SDS-PAGE電泳結果顯示,與6×His Tag融閤錶達的產物蛋白分子量約為18 kD左右,錶達量約佔細胞總蛋白的5.35%.Western blot印跡顯示,融閤錶達產物能與意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清髮生免疫反應.生物活性測定顯示,含錶達產物的細胞蛋白粗提物對底物蛋黃的酶活力約為6.13 μmol·min-1·mg-1.
이용Bac to Bac계통장의대리밀봉봉독린지매A2(AmPLA2)기인cDNA극륭지전이재체pFastBacHTa중,득도pBacHT-AmPLA2,재장기전화입함천사재체Bacmid적수체대장간균DH10Bac중,통과전좌작용,득도함AmPLA2기인적중조병독rBacmid-AmPLA2적DNA.제취기기인조DNA,용지질체개도전염분문야아세포Tn-5B1-4,득도중조병독rACV-Bac-AmPLA2.용차중조병독감염Tn-5B1-4세포,재세포중표체AmPLA2.SDS-PAGE전영결과현시,여6×His Tag융합표체적산물단백분자량약위18 kD좌우,표체량약점세포총단백적5.35%.Western blot인적현시,융합표체산물능여의대리밀봉봉독AmPLA2항혈청발생면역반응.생물활성측정현시,함표체산물적세포단백조제물대저물단황적매활력약위6.13 μmol·min-1·mg-1.
