安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2007年
3期
269-271
,共3页
鲍德明%胡乃中%沈际佳%石海%许建明
鮑德明%鬍迺中%瀋際佳%石海%許建明
포덕명%호내중%침제가%석해%허건명
基质金属蛋白酶类%基因表达%克隆,分子
基質金屬蛋白酶類%基因錶達%剋隆,分子
기질금속단백매류%기인표체%극륭,분자
目的 克隆人巨噬细胞金属弹力酶催化域(HMEcd)基因,构建原核表达质粒,在大肠杆菌中表达HMEcd基因融合蛋白.方法 用RT-PCR方法提取人胃癌组织总RNA并扩增出HMEcd cDNA,克隆入pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-HMEcd,双酶切鉴定及DNA测序正确后再将HMEcd cDNA亚克隆至pET-28a(+)载体,构建原核表达载体pET-28a(+)-HMEcd,转化大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达,并行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果 RT-PCR获得预期的HMEcd cDNA,双酶切鉴定及DNA测序证实将HMEcd基因分别正确插入克隆载体和原核表达载体中,SDS-PAGE及Western blotting鉴定证实表达出HMEcd融合蛋白.结论 成功表达出HMEcd基因融合蛋白,为进一步功能实验研究奠定基础.
目的 剋隆人巨噬細胞金屬彈力酶催化域(HMEcd)基因,構建原覈錶達質粒,在大腸桿菌中錶達HMEcd基因融閤蛋白.方法 用RT-PCR方法提取人胃癌組織總RNA併擴增齣HMEcd cDNA,剋隆入pMD18-T載體,構建剋隆載體pMD18-T-HMEcd,雙酶切鑒定及DNA測序正確後再將HMEcd cDNA亞剋隆至pET-28a(+)載體,構建原覈錶達載體pET-28a(+)-HMEcd,轉化大腸桿菌BL21(DE3)誘導錶達,併行SDS-PAGE及Western blotting鑒定.結果 RT-PCR穫得預期的HMEcd cDNA,雙酶切鑒定及DNA測序證實將HMEcd基因分彆正確插入剋隆載體和原覈錶達載體中,SDS-PAGE及Western blotting鑒定證實錶達齣HMEcd融閤蛋白.結論 成功錶達齣HMEcd基因融閤蛋白,為進一步功能實驗研究奠定基礎.
목적 극륭인거서세포금속탄력매최화역(HMEcd)기인,구건원핵표체질립,재대장간균중표체HMEcd기인융합단백.방법 용RT-PCR방법제취인위암조직총RNA병확증출HMEcd cDNA,극륭입pMD18-T재체,구건극륭재체pMD18-T-HMEcd,쌍매절감정급DNA측서정학후재장HMEcd cDNA아극륭지pET-28a(+)재체,구건원핵표체재체pET-28a(+)-HMEcd,전화대장간균BL21(DE3)유도표체,병행SDS-PAGE급Western blotting감정.결과 RT-PCR획득예기적HMEcd cDNA,쌍매절감정급DNA측서증실장HMEcd기인분별정학삽입극륭재체화원핵표체재체중,SDS-PAGE급Western blotting감정증실표체출HMEcd융합단백.결론 성공표체출HMEcd기인융합단백,위진일보공능실험연구전정기출.
