CAJ | 학술논문

以牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)基因组DNA为模板,PCR扩增gG基因,克隆到T载体pMD18-T,经限制性酶切分析及序列测定鉴定正确后,进一步亚克隆至原核表达载体pGEX-KG.SDS-PAGE和Western blot分析表明,该基因在大肠杆菌BL21(DE3)中呈可溶性及包涵体两种形式表达,重组蛋白质具有免疫学活性.包涵体蛋白经提纯、变性、复性后,作为包被抗原建立了gG-ELISA诊断方法.应用该方法与进口试剂盒(IDEXX)平行检测380份血清样品,两种方法的符合率为92%(351/380).对6份病毒分离阳性血清的检测均为阳性,对非相关病原的阳性血清及中监所的阴性血清检测均为阴性,表明所建立的IBRV gG抗体的ELISA检测具有良好的灵敏度与特异性.对1248份奶牛血清样本进行了检测,进口牛群的IBRV抗体阳性率平均为21.7%,湖北本地中国黑白花奶牛的抗体阳性率在不同牧场之间变化很大,范围为0.0%～41.5%.
이우전염성비기관염병독(IBRV)기인조DNA위모판,PCR확증gG기인,극륭도T재체pMD18-T,경한제성매절분석급서렬측정감정정학후,진일보아극륭지원핵표체재체pGEX-KG.SDS-PAGE화Western blot분석표명,해기인재대장간균BL21(DE3)중정가용성급포함체량충형식표체,중조단백질구유면역학활성.포함체단백경제순、변성、복성후,작위포피항원건립료gG-ELISA진단방법.응용해방법여진구시제합(IDEXX)평행검측380빈혈청양품,량충방법적부합솔위92%(351/380).대6빈병독분리양성혈청적검측균위양성,대비상관병원적양성혈청급중감소적음성혈청검측균위음성,표명소건립적IBRV gG항체적ELISA검측구유량호적령민도여특이성.대1248빈내우혈청양본진행료검측,진구우군적IBRV항체양성솔평균위21.7%,호북본지중국흑백화내우적항체양성솔재불동목장지간변화흔대,범위위0.0%～41.5%.