华南农业大学学报
華南農業大學學報
화남농업대학학보
JOURNAL OF SOUTH CHINA AGRICULTURAL UNIVERSITY
2008年
2期
90-93,98
,共5页
黄文科%林宝珍%罗琴芳%牛学锋%郭霄峰
黃文科%林寶珍%囉琴芳%牛學鋒%郭霄峰
황문과%림보진%라금방%우학봉%곽소봉
禽流感病毒%HA基因%基因克隆%原核表达
禽流感病毒%HA基因%基因剋隆%原覈錶達
금류감병독%HA기인%기인극륭%원핵표체
采用自行设计的引物,通过PCR的方法,分别从pMD-HA5和pMD-HA9中成功扩增出AIV 0025(HSN1)株和KMⅢ(H9N2)株的血凝素(hemagglutinin,HA)基因,然后分别亚克隆到pET-32a(+)、pET-28a(+)表达载体中,构建并筛选出阳性重组子,分别标记为pET32-HA5、pET28-HA9.将阳性重组质粒转化进B121(DE3)宿主菌中,通过改变IPTG浓度和诱导时间,使重组蛋白获得表达,并确定了最佳诱导条件为IPTG终浓度1.0 mmol/L、诱导时间4～5 h.经SDS-PAGE和 Western-blotting 分析表明,重组蛋白相对分子质量约为85 000和63 000,主要存在于包涵体中,具有良好的免疫学活性.
採用自行設計的引物,通過PCR的方法,分彆從pMD-HA5和pMD-HA9中成功擴增齣AIV 0025(HSN1)株和KMⅢ(H9N2)株的血凝素(hemagglutinin,HA)基因,然後分彆亞剋隆到pET-32a(+)、pET-28a(+)錶達載體中,構建併篩選齣暘性重組子,分彆標記為pET32-HA5、pET28-HA9.將暘性重組質粒轉化進B121(DE3)宿主菌中,通過改變IPTG濃度和誘導時間,使重組蛋白穫得錶達,併確定瞭最佳誘導條件為IPTG終濃度1.0 mmol/L、誘導時間4～5 h.經SDS-PAGE和 Western-blotting 分析錶明,重組蛋白相對分子質量約為85 000和63 000,主要存在于包涵體中,具有良好的免疫學活性.
채용자행설계적인물,통과PCR적방법,분별종pMD-HA5화pMD-HA9중성공확증출AIV 0025(HSN1)주화KMⅢ(H9N2)주적혈응소(hemagglutinin,HA)기인,연후분별아극륭도pET-32a(+)、pET-28a(+)표체재체중,구건병사선출양성중조자,분별표기위pET32-HA5、pET28-HA9.장양성중조질립전화진B121(DE3)숙주균중,통과개변IPTG농도화유도시간,사중조단백획득표체,병학정료최가유도조건위IPTG종농도1.0 mmol/L、유도시간4～5 h.경SDS-PAGE화 Western-blotting 분석표명,중조단백상대분자질량약위85 000화63 000,주요존재우포함체중,구유량호적면역학활성.
