南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
5期
671-674
,共4页
刘爱华%龚小卫%魏洁%明小燕%王达安%邓鹏%罗深秋%姜勇
劉愛華%龔小衛%魏潔%明小燕%王達安%鄧鵬%囉深鞦%薑勇
류애화%공소위%위길%명소연%왕체안%산붕%라심추%강용
p53%定点突变%载体构建%基因表达%细胞凋亡%亚砷酸盐
p53%定點突變%載體構建%基因錶達%細胞凋亡%亞砷痠鹽
p53%정점돌변%재체구건%기인표체%세포조망%아신산염
目的 构建人p53的不同突变体,并在真核细胞中表达,研究这些突变体对应激刺激诱导细胞凋亡的影响.方法 采用PCR方法扩增人p53 cDNA序列,使用常规酶切、连接方法将其重组至pcDNA3/HA载体中,对阳性克隆进行酶切和PCR鉴定.将阳性重组体的第15位和第46位丝氨酸突变为丙氨酸,并转染NIH3T3细胞,观察其在NIH3T3细胞内的表达情况.转染不同突变体的NIH3T3细胞用Annexin V-FITC和碘化丙啶双标后,利用流式细胞术检测亚砷酸盐刺激前后的凋亡情况.结果 构建的pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)peDNA3/I-IA-p53(S46A)是正确的,且能在NIH3T3细胞内有效表达.流式细胞术检测表明,p53(WT)的表达使亚砷酸盐诱导的细胞凋亡增加,p53(S15A)的表达使细胞凋亡减少.而p53(S46A)没有明显影响.结论 p53的第15位丝氨酸在其介导亚砷酸盐诱导的细胞凋亡中具有重要作用.
目的 構建人p53的不同突變體,併在真覈細胞中錶達,研究這些突變體對應激刺激誘導細胞凋亡的影響.方法 採用PCR方法擴增人p53 cDNA序列,使用常規酶切、連接方法將其重組至pcDNA3/HA載體中,對暘性剋隆進行酶切和PCR鑒定.將暘性重組體的第15位和第46位絲氨痠突變為丙氨痠,併轉染NIH3T3細胞,觀察其在NIH3T3細胞內的錶達情況.轉染不同突變體的NIH3T3細胞用Annexin V-FITC和碘化丙啶雙標後,利用流式細胞術檢測亞砷痠鹽刺激前後的凋亡情況.結果 構建的pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)peDNA3/I-IA-p53(S46A)是正確的,且能在NIH3T3細胞內有效錶達.流式細胞術檢測錶明,p53(WT)的錶達使亞砷痠鹽誘導的細胞凋亡增加,p53(S15A)的錶達使細胞凋亡減少.而p53(S46A)沒有明顯影響.結論 p53的第15位絲氨痠在其介導亞砷痠鹽誘導的細胞凋亡中具有重要作用.
목적 구건인p53적불동돌변체,병재진핵세포중표체,연구저사돌변체대응격자격유도세포조망적영향.방법 채용PCR방법확증인p53 cDNA서렬,사용상규매절、련접방법장기중조지pcDNA3/HA재체중,대양성극륭진행매절화PCR감정.장양성중조체적제15위화제46위사안산돌변위병안산,병전염NIH3T3세포,관찰기재NIH3T3세포내적표체정황.전염불동돌변체적NIH3T3세포용Annexin V-FITC화전화병정쌍표후,이용류식세포술검측아신산염자격전후적조망정황.결과 구건적pcDNA3/HA-p53(WT)、pcDNA3/HA-p53(S15A)peDNA3/I-IA-p53(S46A)시정학적,차능재NIH3T3세포내유효표체.류식세포술검측표명,p53(WT)적표체사아신산염유도적세포조망증가,p53(S15A)적표체사세포조망감소.이p53(S46A)몰유명현영향.결론 p53적제15위사안산재기개도아신산염유도적세포조망중구유중요작용.
