CAJ | 학술논문

目的制备人脐带血CD34 +造血干细胞来源的负载HPV18E7 基因的树突状细胞(DC)疫苗, 并观察其在体外对人食管癌细胞的杀伤活性.方法采用微磁珠分选系统(MiniMACS)从脐带血单个核细胞中分离CD34 +干细胞, 以重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rh-GM-CSF)和重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)各200 ng/ml 和100 U/ml 诱导其向DC 分化, 采用阳离子脂质体DMRIE-C 介导HPV18E7 基因进入DC, 制备DC 疫苗.倒置相差显微镜下观察DC 的生长情况和形态变化;流式细胞仪检测疫苗表面目的基因E7 蛋白的表达情况;MTT 法检测DC 疫苗致敏的同种异体外周血T 淋巴细胞在体外对表达HPV18E7 的食管癌细胞EC-109 的杀伤活性.结果脐带血CD34 +干细胞在细胞因子诱导下, 细胞体积增大, 形状由圆形变得不规则形, 细胞数量增多, 形成细胞集落.经过14 d 的培养, 大部分的细胞从集落上脱落下来成为成熟的DC, 具有典型的树枝状突起.E7 蛋白的阳性表达率为47.5%, 说明基因转染成功.DC 疫苗致敏的淋巴细胞在体外对EC-109 细胞的杀伤活性明显强于未转基因DC 致敏的淋巴细胞组、T 淋巴细胞组和对照组(P ＜0.01), 且随效靶比的增高而增强(P ＜0.05).结论人脐带血干细胞在细胞因子的诱导下能扩增分化为DC, 经肿瘤相关病毒抗原基因转染获得的DC 疫苗, 高表达目的基因蛋白, 并能显著增强淋巴细胞对相应人食管癌细胞的体外杀伤效应.
목적 제비인제대혈CD34 +조혈간세포래원적부재HPV18E7 기인적수돌상세포(DC)역묘, 병관찰기재체외대인식관암세포적살상활성.방법 채용미자주분선계통(MiniMACS)종제대혈단개핵세포중분리CD34 +간세포, 이중조인립세포-거서세포집락자격인자(rh-GM-CSF)화중조인종류배사인자-α(rhTNF-α)각200 ng/ml 화100 U/ml 유도기향DC 분화, 채용양리자지질체DMRIE-C 개도HPV18E7 기인진입DC, 제비DC 역묘.도치상차현미경하관찰DC 적생장정황화형태변화;류식세포의검측역묘표면목적기인E7 단백적표체정황;MTT 법검측DC 역묘치민적동충이체외주혈T 림파세포재체외대표체HPV18E7 적식관암세포EC-109 적살상활성.결과 제대혈CD34 +간세포재세포인자유도하, 세포체적증대, 형상유원형변득불규칙형, 세포수량증다, 형성세포집락.경과14 d 적배양, 대부분적세포종집락상탈락하래성위성숙적DC, 구유전형적수지상돌기.E7 단백적양성표체솔위47.5%, 설명기인전염성공.DC 역묘치민적림파세포재체외대EC-109 세포적살상활성명현강우미전기인DC 치민적림파세포조、T 림파세포조화대조조(P ＜0.01), 차수효파비적증고이증강(P ＜0.05).결론 인제대혈간세포재세포인자적유도하능확증분화위DC, 경종류상관병독항원기인전염획득적DC 역묘, 고표체목적기인단백, 병능현저증강림파세포대상응인식관암세포적체외살상효응.