CAJ | 학술논문

目的:探讨构建人脐带间充质干细胞(huMSCs)的人转化生长因子(hTGF)β3基因稳定表达系统的可行性,为进一步探讨创面治疗的研究打下基础.方法:用组织贴壁法原代培养huMSCs,流式细胞术(FCM)鉴定细胞表而抗原CD29、34、44、45和80,用脂质体介导的转染技术将人pcDNA3.1(-)/TGF-β3重组质粒转染进入huMSCs,并用G418进行筛选得到单克隆细胞,扩增后得到稳定表达人TGF-β3细胞株,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学技术检测转染前、后及筛选前、后细胞内TGF-β3基因表达,再次采用FCM检测细胞表而抗原表达变化,最后Western blot检测稳定表达组及未转染huMSCs的TGF-β3蛋白表达.结果:原代培养的HuMSCs中约70%的细胞表达表面抗原CD29、44,而绝大部分不表达CD34、45和80,原代培养的细胞符合huMSCs特性.免疫细胞化学染色显示瞬时转染率为(10.0±0.2)%,稳定转染率(85.0±0.7)%(P＜0.05),RT-PCR、Western blot显示转染并通过G418筛选的huMSCs高表达hTGF-f13,转染hTGF-β3基因的huMSCs其表面抗原与未转染前保持一致.结论:HuMSCs的hTGF-β3基因稳定表达系统构建成功,转染hTGF-β3基因的huMSCs体外培养条件下仍保持干细胞特性.
목적:탐토구건인제대간충질간세포(huMSCs)적인전화생장인자(hTGF)β3기인은정표체계통적가행성,위진일보탐토창면치료적연구타하기출.방법:용조직첩벽법원대배양huMSCs,류식세포술(FCM)감정세포표이항원CD29、34、44、45화80,용지질체개도적전염기술장인pcDNA3.1(-)/TGF-β3중조질립전염진입huMSCs,병용G418진행사선득도단극륭세포,확증후득도은정표체인TGF-β3세포주,역전록다취매련반응(RT-PCR)화면역세포화학기술검측전염전、후급사선전、후세포내TGF-β3기인표체,재차채용FCM검측세포표이항원표체변화,최후Western blot검측은정표체조급미전염huMSCs적TGF-β3단백표체.결과:원대배양적HuMSCs중약70%적세포표체표면항원CD29、44,이절대부분불표체CD34、45화80,원대배양적세포부합huMSCs특성.면역세포화학염색현시순시전염솔위(10.0±0.2)%,은정전염솔(85.0±0.7)%(P＜0.05),RT-PCR、Western blot현시전염병통과G418사선적huMSCs고표체hTGF-f13,전염hTGF-β3기인적huMSCs기표면항원여미전염전보지일치.결론:HuMSCs적hTGF-β3기인은정표체계통구건성공,전염hTGF-β3기인적huMSCs체외배양조건하잉보지간세포특성.