CAJ | 학술논문

目的:研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径,探讨它们在肺血管重构中的作用机制.方法:分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞,应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路,应用骨形态发生蛋白2(BMP-2)启动BMP信号通路,并用Rho激酶抑制剂Y-27632、MEK抑制剂U0126进行干预.培养细胞分成5组:(1)对照组;(2)BMP-2组;(3)BMP-2+PDGF-BB组;(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组;(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126组.免疫荧光染色标记p-Smad1在细胞核内外的分布并计算p-Smad1核迁移阳性细胞百分数(即核迁移率).分离平滑肌细胞核蛋白和胞浆蛋白,Western blotting分析p-Smad1在细胞内的总量和细胞核内外相对含量的变化.Kit-WST-8试剂盒检测细胞增殖.结果:BMP-2组p-Smad1在细胞内的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率明显高于对照组(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB 组p-Smad1的核迁移率和在细胞核中的相对含量明显低于BMP-2组(P＜0.05),但是细胞内p-Smad1总量无明显改变(P＞0.05);BMP-2+PDGF-BB+ Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组细胞内p-Smad1的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率与BMP-2组基本相似(P＞0.05).BMP-2组的A值明显小于对照组(P＜0.05);PDGF-BB+BMP-2组的A值明显大于BMP-2组(P＜0.05)且大于对照组(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组的A值均小于PDGF-BB+BMP-2组(P＜0.05).结论:在大鼠肺动脉平滑肌细胞,PDGF-BB激活的Rho激酶通过MEK/ERK1/2抑制BMP-2引起的p-Smad1核迁移,促进平滑肌细胞增殖.
목적:연구Rho격매대p-Smad1핵천이적작용급신호전도도경,탐토타문재폐혈관중구중적작용궤제.방법:분리배양대서원단폐동맥평활기세포,응용혈소판원성생장인자BB(PDGF-BB)계동폐동맥평활기세포Rho격매신호통로,응용골형태발생단백2(BMP-2)계동BMP신호통로,병용Rho격매억제제Y-27632、MEK억제제U0126진행간예.배양세포분성5조:(1)대조조;(2)BMP-2조;(3)BMP-2+PDGF-BB조;(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632조;(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126조.면역형광염색표기p-Smad1재세포핵내외적분포병계산p-Smad1핵천이양성세포백분수(즉핵천이솔).분리평활기세포핵단백화포장단백,Western blotting분석p-Smad1재세포내적총량화세포핵내외상대함량적변화.Kit-WST-8시제합검측세포증식.결과:BMP-2조p-Smad1재세포내적총량、재세포핵중적상대함량화핵천이솔명현고우대조조(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB 조p-Smad1적핵천이솔화재세포핵중적상대함량명현저우BMP-2조(P＜0.05),단시세포내p-Smad1총량무명현개변(P＞0.05);BMP-2+PDGF-BB+ Y-27632조화BMP-2+PDGF-BB+U0126조세포내p-Smad1적총량、재세포핵중적상대함량화핵천이솔여BMP-2조기본상사(P＞0.05).BMP-2조적A치명현소우대조조(P＜0.05);PDGF-BB+BMP-2조적A치명현대우BMP-2조(P＜0.05)차대우대조조(P＜0.05);BMP-2+PDGF-BB+Y-27632조화BMP-2+PDGF-BB+U0126조적A치균소우PDGF-BB+BMP-2조(P＜0.05).결론:재대서폐동맥평활기세포,PDGF-BB격활적Rho격매통과MEK/ERK1/2억제BMP-2인기적p-Smad1핵천이,촉진평활기세포증식.