畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
6期
808-814
,共7页
赵玲%朱玲%郭万柱%徐志文%漆信桥%李凤勤
趙玲%硃玲%郭萬柱%徐誌文%漆信橋%李鳳勤
조령%주령%곽만주%서지문%칠신교%리봉근
圆环病毒2型%Cap蛋白%间接ELISA
圓環病毒2型%Cap蛋白%間接ELISA
원배병독2형%Cap단백%간접ELISA
本研究旨在建立以PCV2 Cap蛋白为包被抗原的间接ELISA检测方法,构建猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因原核表达质粒pET32a-ORF2并转化至Rosetta菌,在1.0 mmol·L-1 IPTG和37℃条件下诱导下,Cap蛋白获得高效表达,Western blot检测证实其具有免疫反应活性,以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪圆环病毒2型抗体的间接ELISA方法.结果表明抗原最适包被浓度为2.16μg·mL-1;血清最佳稀释度为1:40;抗原最佳包被条件为4℃过夜;最佳封闭条件为1%BSA 37℃1 h;血清反应时间为37℃30 min;酶标二抗最适作用时间为37℃45 min;底物最佳反应条件为37℃显色15 min.用该方法对四川省184份猪血清样品进行检测,总阳性率为80.98%(149/184),与商品化的PCV2 ELISA试剂盒得到的结果基本一致.本试验成功建立了PCv2血清抗体间接ELISA方法,具有较高的敏感性和特异性,可用于大规模的血清学检测.
本研究旨在建立以PCV2 Cap蛋白為包被抗原的間接ELISA檢測方法,構建豬圓環病毒2型(PCV2)ORF2基因原覈錶達質粒pET32a-ORF2併轉化至Rosetta菌,在1.0 mmol·L-1 IPTG和37℃條件下誘導下,Cap蛋白穫得高效錶達,Western blot檢測證實其具有免疫反應活性,以純化的蛋白為抗原建立瞭檢測豬圓環病毒2型抗體的間接ELISA方法.結果錶明抗原最適包被濃度為2.16μg·mL-1;血清最佳稀釋度為1:40;抗原最佳包被條件為4℃過夜;最佳封閉條件為1%BSA 37℃1 h;血清反應時間為37℃30 min;酶標二抗最適作用時間為37℃45 min;底物最佳反應條件為37℃顯色15 min.用該方法對四川省184份豬血清樣品進行檢測,總暘性率為80.98%(149/184),與商品化的PCV2 ELISA試劑盒得到的結果基本一緻.本試驗成功建立瞭PCv2血清抗體間接ELISA方法,具有較高的敏感性和特異性,可用于大規模的血清學檢測.
본연구지재건립이PCV2 Cap단백위포피항원적간접ELISA검측방법,구건저원배병독2형(PCV2)ORF2기인원핵표체질립pET32a-ORF2병전화지Rosetta균,재1.0 mmol·L-1 IPTG화37℃조건하유도하,Cap단백획득고효표체,Western blot검측증실기구유면역반응활성,이순화적단백위항원건립료검측저원배병독2형항체적간접ELISA방법.결과표명항원최괄포피농도위2.16μg·mL-1;혈청최가희석도위1:40;항원최가포피조건위4℃과야;최가봉폐조건위1%BSA 37℃1 h;혈청반응시간위37℃30 min;매표이항최괄작용시간위37℃45 min;저물최가반응조건위37℃현색15 min.용해방법대사천성184빈저혈청양품진행검측,총양성솔위80.98%(149/184),여상품화적PCV2 ELISA시제합득도적결과기본일치.본시험성공건립료PCv2혈청항체간접ELISA방법,구유교고적민감성화특이성,가용우대규모적혈청학검측.
