中国抗生素杂志
中國抗生素雜誌
중국항생소잡지
CHINESE JOURNAL OF ANTIBIOTICS
2012年
2期
105-111
,共7页
李军%朱清华%张云%马俊英%田新朋%李文均%张长生%鞠建华
李軍%硃清華%張雲%馬俊英%田新朋%李文均%張長生%鞠建華
리군%주청화%장운%마준영%전신붕%리문균%장장생%국건화
M.thermotolerans SCSIO 00652%NRPSs%sl02-A%s63-A%PCR-Targeting%接合转移%松弛培养
M.thermotolerans SCSIO 00652%NRPSs%sl02-A%s63-A%PCR-Targeting%接閤轉移%鬆弛培養
M.thermotolerans SCSIO 00652%NRPSs%sl02-A%s63-A%PCR-Targeting%접합전이%송이배양
目的 建立深海放线菌Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652菌株的遗传操作系统,通过基因阻断研究次级代谢产物的生物合成途径.方法 在对该菌株的全基因组进行测序的基础上,以基因组序列中编码非核糖体肽合成酶(Nonribosomal peptide synthetase,NRPSs)的基因sl02-A和s63-A为目标基因,利用PCR-targeting介导的基因置换技术构建了重组质粒,在加有3％海盐的培养基上,通过ET12567/pUZ8002属间接合转移导入SCSIO 00652野生菌.结果 接合子通过一代、二代松弛培养都无法得到双交换突变菌株,松弛培养四代后经抗性筛选,双交换率明显提高,PCR分析结果显示s102-A基因和s63-A基因均被成功阻断,HPLC分析结果显示突变株的发酵产物与野生型菌株有一定的差异.结论 成功建立了深海放线菌M.thermotolerans SCSIO 00652的遗传操作系统,为对其它基因进行遗传学操作奠定了基础.
目的 建立深海放線菌Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652菌株的遺傳操作繫統,通過基因阻斷研究次級代謝產物的生物閤成途徑.方法 在對該菌株的全基因組進行測序的基礎上,以基因組序列中編碼非覈糖體肽閤成酶(Nonribosomal peptide synthetase,NRPSs)的基因sl02-A和s63-A為目標基因,利用PCR-targeting介導的基因置換技術構建瞭重組質粒,在加有3％海鹽的培養基上,通過ET12567/pUZ8002屬間接閤轉移導入SCSIO 00652野生菌.結果 接閤子通過一代、二代鬆弛培養都無法得到雙交換突變菌株,鬆弛培養四代後經抗性篩選,雙交換率明顯提高,PCR分析結果顯示s102-A基因和s63-A基因均被成功阻斷,HPLC分析結果顯示突變株的髮酵產物與野生型菌株有一定的差異.結論 成功建立瞭深海放線菌M.thermotolerans SCSIO 00652的遺傳操作繫統,為對其它基因進行遺傳學操作奠定瞭基礎.
목적 건립심해방선균Marinactinospora thermotolerans SCSIO 00652균주적유전조작계통,통과기인조단연구차급대사산물적생물합성도경.방법 재대해균주적전기인조진행측서적기출상,이기인조서렬중편마비핵당체태합성매(Nonribosomal peptide synthetase,NRPSs)적기인sl02-A화s63-A위목표기인,이용PCR-targeting개도적기인치환기술구건료중조질립,재가유3％해염적배양기상,통과ET12567/pUZ8002속간접합전이도입SCSIO 00652야생균.결과 접합자통과일대、이대송이배양도무법득도쌍교환돌변균주,송이배양사대후경항성사선,쌍교환솔명현제고,PCR분석결과현시s102-A기인화s63-A기인균피성공조단,HPLC분석결과현시돌변주적발효산물여야생형균주유일정적차이.결론 성공건립료심해방선균M.thermotolerans SCSIO 00652적유전조작계통,위대기타기인진행유전학조작전정료기출.
