实用预防医学
實用預防醫學
실용예방의학
PRACTICAL PREVENTIVE MEDICINE
2005年
6期
1257-1260
,共4页
张晓红%唐圣松%李剑敏%龙治锋
張曉紅%唐聖鬆%李劍敏%龍治鋒
장효홍%당골송%리검민%룡치봉
巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)%增强型绿色荧光蛋白(EGFP)%基因表达
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)%增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)%基因錶達
거서세포집락자격인자(M-CSF)%증강형록색형광단백(EGFP)%기인표체
目的构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并鉴定其在小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞能否正确表达.方法PCR扩增M-CSF基因,定向克隆入带有EGFP报告基因的真核表达载体,构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,脂质体介导将pEGFP-M-CSF转染入NIH3T3细胞,以一步法RT-PCR检测其在NIH3T3细胞中的表达情况.结果双酶切及测序鉴定证明成功构建真核表达重组体pEGFP-M-CSF,并在NIH3T3细胞中成功地表达了融合荧光蛋白,RT-PCR检测结果显示RT-PCR扩增产物与M-CSF目的基因片段大小相符,确实源于重组质粒转录后的mRNA.结论真核表达重组体pEGFP-M-CSF的成功构建及在体外真核细胞中有效表达,为进一步研究M-CSF在真核细胞中的信号调控奠定了一定的实验基础.
目的構建真覈錶達重組體pEGFP-M-CSF,併鑒定其在小鼠成纖維細胞NIH3T3細胞能否正確錶達.方法PCR擴增M-CSF基因,定嚮剋隆入帶有EGFP報告基因的真覈錶達載體,構建真覈錶達重組體pEGFP-M-CSF,脂質體介導將pEGFP-M-CSF轉染入NIH3T3細胞,以一步法RT-PCR檢測其在NIH3T3細胞中的錶達情況.結果雙酶切及測序鑒定證明成功構建真覈錶達重組體pEGFP-M-CSF,併在NIH3T3細胞中成功地錶達瞭融閤熒光蛋白,RT-PCR檢測結果顯示RT-PCR擴增產物與M-CSF目的基因片段大小相符,確實源于重組質粒轉錄後的mRNA.結論真覈錶達重組體pEGFP-M-CSF的成功構建及在體外真覈細胞中有效錶達,為進一步研究M-CSF在真覈細胞中的信號調控奠定瞭一定的實驗基礎.
목적구건진핵표체중조체pEGFP-M-CSF,병감정기재소서성섬유세포NIH3T3세포능부정학표체.방법PCR확증M-CSF기인,정향극륭입대유EGFP보고기인적진핵표체재체,구건진핵표체중조체pEGFP-M-CSF,지질체개도장pEGFP-M-CSF전염입NIH3T3세포,이일보법RT-PCR검측기재NIH3T3세포중적표체정황.결과쌍매절급측서감정증명성공구건진핵표체중조체pEGFP-M-CSF,병재NIH3T3세포중성공지표체료융합형광단백,RT-PCR검측결과현시RT-PCR확증산물여M-CSF목적기인편단대소상부,학실원우중조질립전록후적mRNA.결론진핵표체중조체pEGFP-M-CSF적성공구건급재체외진핵세포중유효표체,위진일보연구M-CSF재진핵세포중적신호조공전정료일정적실험기출.
