CAJ | 학술논문

目的 : 构建丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)第60-80位氨基酸多肽缺失核蛋白的真核表达载体,并在真核细胞中表达. 方法: 用RT-PCR方法从西安地区丙型肝炎患者血清中扩增HCV C区及部分E1区基因并进行克隆、测序,以此为模板用重叠延伸拼接方法扩增第60-80 位氨基酸多肽基因缺失的核蛋白基因片段(C510),将其定向克隆入哺乳动物高效表达载体pCI-neo中,通过Lipofectamine2000转染入p815细胞,经间接免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜和Western-Blotting方法检测细胞中目的蛋白的表达.结果: 从患者血清中成功克隆出HCV C区基因,序列及系统发生树分析结果显示为1b型;测序结果显示构建的第60-80位氨基酸多肽缺失核蛋白基因的重组真核表达质粒pCI-510基因序列准确;免疫荧光和免疫印迹方法均证实目的蛋白p170可在p815细胞中表达.结论: 重组体pCI-510构建正确,其目的基因在p815细胞中可有效表达,为进一步的研究奠定了基础.
목적 : 구건병형간염병독(hepatitis C virus,HCV)제60-80위안기산다태결실핵단백적진핵표체재체,병재진핵세포중표체. 방법: 용RT-PCR방법종서안지구병형간염환자혈청중확증HCV C구급부분E1구기인병진행극륭、측서,이차위모판용중첩연신병접방법확증제60-80 위안기산다태기인결실적핵단백기인편단(C510),장기정향극륭입포유동물고효표체재체pCI-neo중,통과Lipofectamine2000전염입p815세포,경간접면역형광염색、격광공취초현미경화Western-Blotting방법검측세포중목적단백적표체.결과: 종환자혈청중성공극륭출HCV C구기인,서렬급계통발생수분석결과현시위1b형;측서결과현시구건적제60-80위안기산다태결실핵단백기인적중조진핵표체질립pCI-510기인서렬준학;면역형광화면역인적방법균증실목적단백p170가재p815세포중표체.결론: 중조체pCI-510구건정학,기목적기인재p815세포중가유효표체,위진일보적연구전정료기출.