微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2006年
6期
89-94
,共6页
许一平%成炜%邵彦春%陈福生
許一平%成煒%邵彥春%陳福生
허일평%성위%소언춘%진복생
多重PCR%沙门菌%大肠杆菌%金黄色葡萄球菌
多重PCR%沙門菌%大腸桿菌%金黃色葡萄毬菌
다중PCR%사문균%대장간균%금황색포도구균
根据沙门菌invA基因、大肠杆菌phoA基因和金黄色葡萄球菌nuc基因序列,设计3对特异性引物进行多重PCR并对反应条件进行优化.结果表明3对引物能特异地扩增出284bp、622bp、484bp的目的条带;最佳反应条件为沙门菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的引物浓度分别为40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg2+浓度2.4mmol/L,dNTP浓度200μmol/L,Taq DNA聚合酶1.5U,退火温度55.0℃～57.4℃之间;在此条件下多重PCR同时检测DNA的敏感性分别是10.2pg、10.2pg、102.0pg,检测时间4h.建立的多重PCR是一种敏感、特异、准确、快速的方法,为同时检测食品中沙门菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌奠定了基础.
根據沙門菌invA基因、大腸桿菌phoA基因和金黃色葡萄毬菌nuc基因序列,設計3對特異性引物進行多重PCR併對反應條件進行優化.結果錶明3對引物能特異地擴增齣284bp、622bp、484bp的目的條帶;最佳反應條件為沙門菌、大腸桿菌、金黃色葡萄毬菌的引物濃度分彆為40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg2+濃度2.4mmol/L,dNTP濃度200μmol/L,Taq DNA聚閤酶1.5U,退火溫度55.0℃～57.4℃之間;在此條件下多重PCR同時檢測DNA的敏感性分彆是10.2pg、10.2pg、102.0pg,檢測時間4h.建立的多重PCR是一種敏感、特異、準確、快速的方法,為同時檢測食品中沙門菌、大腸桿菌和金黃色葡萄毬菌奠定瞭基礎.
근거사문균invA기인、대장간균phoA기인화금황색포도구균nuc기인서렬,설계3대특이성인물진행다중PCR병대반응조건진행우화.결과표명3대인물능특이지확증출284bp、622bp、484bp적목적조대;최가반응조건위사문균、대장간균、금황색포도구균적인물농도분별위40nmol/L、40nmol/L、80nmol/L,Mg2+농도2.4mmol/L,dNTP농도200μmol/L,Taq DNA취합매1.5U,퇴화온도55.0℃～57.4℃지간;재차조건하다중PCR동시검측DNA적민감성분별시10.2pg、10.2pg、102.0pg,검측시간4h.건립적다중PCR시일충민감、특이、준학、쾌속적방법,위동시검측식품중사문균、대장간균화금황색포도구균전정료기출.
