Bcr-Abl酪氨酸蛋白激酶域及其突变体的构建和表达
Bcr-Abl락안산단백격매역급기돌변체적구건화표체
Production, expression and purification of Bcr-Abl tyrosine kinase domain and its mutants
  • 万方数据
    第四军医大学学报 제사군의대학학보
    JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
    2006年 15期 1361-1364 ,共4页

    王淑红%梁英民%邢佩霓%刘海妮%王耀春%杨曦%蒋珊珊%李军林%李军锋

    왕숙홍%량영민%형패예%류해니%왕요춘%양희%장산산%리군림%리군봉

    蛋白质酪氨酸激酶%突变%重组,遗传%聚合酶链反应%融合表达%蛋白纯化 蛋白質酪氨痠激酶%突變%重組,遺傳%聚閤酶鏈反應%融閤錶達%蛋白純化
    단백질락안산격매%돌변%중조,유전%취합매련반응%융합표체%단백순화
    目的:制备Bcr-Abl激酶域及其突变体-His的重组蛋白. 方法:用PCR方法从含有Bcr-Abl全长的质粒pGD210中扩增出Bcr-Abl激酶域片段,再通过重组PCR技术获得激酶域的几个主要突变体(T315I,Y253F,E255K,E255V),测序正确后将其克隆到原核表达载体pET-32a中,构建表达激酶域片段和His标签融合表达的载体,IPTG诱导表达,得到的融合蛋白用镍-次氮基三乙酸(Ni-NTA)琼脂糖进行亲和层析纯化. 结果:成功得到了Bcr-Abl激酶域及其突变体序列,经序列分析证实后将重组质粒转入BL-21进行表达. 结论: 通过重组PCR技术获得了野生型激酶域及其突变体蛋白. 融合蛋白表达在包涵体,占菌体总蛋白的70%以上. 经Ni-NTA镍珠纯化后,纯度在95%以上.
    목적:제비Bcr-Abl격매역급기돌변체-His적중조단백. 방법:용PCR방법종함유Bcr-Abl전장적질립pGD210중확증출Bcr-Abl격매역편단,재통과중조PCR기술획득격매역적궤개주요돌변체(T315I,Y253F,E255K,E255V),측서정학후장기극륭도원핵표체재체pET-32a중,구건표체격매역편단화His표첨융합표체적재체,IPTG유도표체,득도적융합단백용얼-차담기삼을산(Ni-NTA)경지당진행친화층석순화. 결과:성공득도료Bcr-Abl격매역급기돌변체서렬,경서렬분석증실후장중조질립전입BL-21진행표체. 결론: 통과중조PCR기술획득료야생형격매역급기돌변체단백. 융합단백표체재포함체,점균체총단백적70%이상. 경Ni-NTA얼주순화후,순도재95%이상.
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