临床军医杂志
臨床軍醫雜誌
림상군의잡지
CLINICAL JOURNAL OF MEDICAL OFFICER
2008年
3期
330-333
,共4页
RNA干扰%慢病毒%CD151
RNA榦擾%慢病毒%CD151
RNA간우%만병독%CD151
目的 构建人的CD151基因RNAi慢病毒载体.并建立A549-CD151i稳定细胞株.方法 根据人的CD151基因序列,设计三对RNAi序列,筛选出有效序列,利用此有效序列,合成相对应的Oligo DNA,退火后形成黏性末端的DNA双链,与双酶切后的pshRNA-Lentivector载体连接得到LV-CD151i慢病毒载体,转化TOP10感受态细胞,PCR筛选阳性克隆,并进行测序鉴定.用LV-CD151i和包装质粒共转染慢病毒包装用293T细胞,生产慢病毒并检测获得的病毒滴度.利用所获得的慢病毒感染A549细胞,筛选稳定转染细胞株.结果 测序证实,成功构建CD151 RNAi的慢病毒载体,并包装慢病毒,检测病毒悬液的滴度为5×108 ifu,并利用此病毒悬液,成功感染A549细胞,筛选到稳定表达细胞株.结论 成功构建人CD151基因RNAi慢病毒载体,并建立稳定的A549-CD151i细胞株.
目的 構建人的CD151基因RNAi慢病毒載體.併建立A549-CD151i穩定細胞株.方法 根據人的CD151基因序列,設計三對RNAi序列,篩選齣有效序列,利用此有效序列,閤成相對應的Oligo DNA,退火後形成黏性末耑的DNA雙鏈,與雙酶切後的pshRNA-Lentivector載體連接得到LV-CD151i慢病毒載體,轉化TOP10感受態細胞,PCR篩選暘性剋隆,併進行測序鑒定.用LV-CD151i和包裝質粒共轉染慢病毒包裝用293T細胞,生產慢病毒併檢測穫得的病毒滴度.利用所穫得的慢病毒感染A549細胞,篩選穩定轉染細胞株.結果 測序證實,成功構建CD151 RNAi的慢病毒載體,併包裝慢病毒,檢測病毒懸液的滴度為5×108 ifu,併利用此病毒懸液,成功感染A549細胞,篩選到穩定錶達細胞株.結論 成功構建人CD151基因RNAi慢病毒載體,併建立穩定的A549-CD151i細胞株.
목적 구건인적CD151기인RNAi만병독재체.병건립A549-CD151i은정세포주.방법 근거인적CD151기인서렬,설계삼대RNAi서렬,사선출유효서렬,이용차유효서렬,합성상대응적Oligo DNA,퇴화후형성점성말단적DNA쌍련,여쌍매절후적pshRNA-Lentivector재체련접득도LV-CD151i만병독재체,전화TOP10감수태세포,PCR사선양성극륭,병진행측서감정.용LV-CD151i화포장질립공전염만병독포장용293T세포,생산만병독병검측획득적병독적도.이용소획득적만병독감염A549세포,사선은정전염세포주.결과 측서증실,성공구건CD151 RNAi적만병독재체,병포장만병독,검측병독현액적적도위5×108 ifu,병이용차병독현액,성공감염A549세포,사선도은정표체세포주.결론 성공구건인CD151기인RNAi만병독재체,병건립은정적A549-CD151i세포주.
