生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2008年
7期
1180-1185
,共6页
Bingbing Zhang%江鹏%Chengyu Xian%李玉筱%Dajun Li%唐丽灵%Yuanliang Wang
Bingbing Zhang%江鵬%Chengyu Xian%李玉篠%Dajun Li%唐麗靈%Yuanliang Wang
Bingbing Zhang%강붕%Chengyu Xian%리옥소%Dajun Li%당려령%Yuanliang Wang
胰岛素样生长因子-1%力生长因子%原核表迭%增殖%迁移
胰島素樣生長因子-1%力生長因子%原覈錶迭%增殖%遷移
이도소양생장인자-1%력생장인자%원핵표질%증식%천이
MGF(Mechano-growth factor)是一种IGF-1变体形式,研究发现该因子具有应力敏感性,并且具有促进肌肉肥大,再生以及神经损伤修复的功能.通过RT-PCR从拉伸刺激的人成骨细胞中克隆MGF cDNA序列.并去除5'端9 bp的序列.使N端缺少对肠激酶(Enterokinase,EK)具有抑制作用的脯氨酸,将截短型MGF(des(1-3)MGF)cDNA序列克隆入pET32a(+))质粒,构建重组表达质粒.重组质粒转化E. coli BL21(DE3),在30℃培养下以可溶形式表达融合蛋白Trx/des(1-3)MGE采用离子交换层析和Ni2+金属亲和层析,获得纯度95%以上的融合蛋白.再对融合蛋白EK酶切,rpHPLC分离获得纯度达98%的des(1-3)MGE SDS-PAGE及质谱分析蛋白分子量与理论值相符.生物活性实验显示.所制备的des(1-3)MGF比des(1-3)IGF-1更显著的促进MC3T3-El细胞的增值和迁移.
MGF(Mechano-growth factor)是一種IGF-1變體形式,研究髮現該因子具有應力敏感性,併且具有促進肌肉肥大,再生以及神經損傷脩複的功能.通過RT-PCR從拉伸刺激的人成骨細胞中剋隆MGF cDNA序列.併去除5'耑9 bp的序列.使N耑缺少對腸激酶(Enterokinase,EK)具有抑製作用的脯氨痠,將截短型MGF(des(1-3)MGF)cDNA序列剋隆入pET32a(+))質粒,構建重組錶達質粒.重組質粒轉化E. coli BL21(DE3),在30℃培養下以可溶形式錶達融閤蛋白Trx/des(1-3)MGE採用離子交換層析和Ni2+金屬親和層析,穫得純度95%以上的融閤蛋白.再對融閤蛋白EK酶切,rpHPLC分離穫得純度達98%的des(1-3)MGE SDS-PAGE及質譜分析蛋白分子量與理論值相符.生物活性實驗顯示.所製備的des(1-3)MGF比des(1-3)IGF-1更顯著的促進MC3T3-El細胞的增值和遷移.
MGF(Mechano-growth factor)시일충IGF-1변체형식,연구발현해인자구유응력민감성,병차구유촉진기육비대,재생이급신경손상수복적공능.통과RT-PCR종랍신자격적인성골세포중극륭MGF cDNA서렬.병거제5'단9 bp적서렬.사N단결소대장격매(Enterokinase,EK)구유억제작용적포안산,장절단형MGF(des(1-3)MGF)cDNA서렬극륭입pET32a(+))질립,구건중조표체질립.중조질립전화E. coli BL21(DE3),재30℃배양하이가용형식표체융합단백Trx/des(1-3)MGE채용리자교환층석화Ni2+금속친화층석,획득순도95%이상적융합단백.재대융합단백EK매절,rpHPLC분리획득순도체98%적des(1-3)MGE SDS-PAGE급질보분석단백분자량여이론치상부.생물활성실험현시.소제비적des(1-3)MGF비des(1-3)IGF-1경현저적촉진MC3T3-El세포적증치화천이.
