中国兽医科学
中國獸醫科學
중국수의과학
VETERINARY SCIENCE IN CHINA
2009年
7期
622-625
,共4页
梁继望%吴发兴%亓传德%张志%刘爽%张燕霞%阿合买提%李晓成
樑繼望%吳髮興%亓傳德%張誌%劉爽%張燕霞%阿閤買提%李曉成
량계망%오발흥%기전덕%장지%류상%장연하%아합매제%리효성
猪生殖与呼吸综合征病毒%dNsp2基因%原核表达
豬生殖與呼吸綜閤徵病毒%dNsp2基因%原覈錶達
저생식여호흡종합정병독%dNsp2기인%원핵표체
参考GenBank中收录的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1株Nsp2基因序列,设计了1对引物用于扩增截短的Nsp2(deleting Nsp2,dNsp2)基因,用BamH Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切后将目的基因插入到原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达,经SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,dNsp2基因得到了高效表达,融合蛋白的分子质量约为36.5 ku,表达产物以可溶性方式存在于表达上清液中,表达量可达菌体总蛋白的30%以上,表达产物能被PRRSV变异株抗体所识别,具有较好的生物学活性.PRRSV变异株dNsp2基因的高效表达为该病毒ELISA检测方法的建立及应用奠定了基础.
參攷GenBank中收錄的豬生殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)JXA1株Nsp2基因序列,設計瞭1對引物用于擴增截短的Nsp2(deleting Nsp2,dNsp2)基因,用BamH Ⅰ+Xho Ⅰ雙酶切後將目的基因插入到原覈錶達載體pET-32a(+)中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)進行錶達,經SDS-PAGE電泳和Western-blot檢測,dNsp2基因得到瞭高效錶達,融閤蛋白的分子質量約為36.5 ku,錶達產物以可溶性方式存在于錶達上清液中,錶達量可達菌體總蛋白的30%以上,錶達產物能被PRRSV變異株抗體所識彆,具有較好的生物學活性.PRRSV變異株dNsp2基因的高效錶達為該病毒ELISA檢測方法的建立及應用奠定瞭基礎.
삼고GenBank중수록적저생식여호흡종합정병독(PRRSV)JXA1주Nsp2기인서렬,설계료1대인물용우확증절단적Nsp2(deleting Nsp2,dNsp2)기인,용BamH Ⅰ+Xho Ⅰ쌍매절후장목적기인삽입도원핵표체재체pET-32a(+)중,전화대장간균BL21(DE3)진행표체,경SDS-PAGE전영화Western-blot검측,dNsp2기인득도료고효표체,융합단백적분자질량약위36.5 ku,표체산물이가용성방식존재우표체상청액중,표체량가체균체총단백적30%이상,표체산물능피PRRSV변이주항체소식별,구유교호적생물학활성.PRRSV변이주dNsp2기인적고효표체위해병독ELISA검측방법적건립급응용전정료기출.
