CAJ | 학술논문

目的:构建用于鉴定microRNA靶基因的报告基因系统.方法:在pGL3-Basic载体的luc基因上游插入CMV启动子,下游插入用于克隆靶基因3'UTR的多克隆位点,构建报告基因载体pMIR-luciferase；将pMIR-lu-ciferase载体的luc基因替换成Rluc基因,构建内参载体pMIR-control；将补体因子H(CFH)的3′UTR插入pMIR-luciferase载体的多克隆位点处,构建含有CFH 3′UTR的报告基因载体；用pIRES2-EGFP载体构建microRNA146a 真核表达载体；将含有CFH 3′UTR的报告基因载体、microRNA146a真核表达载体及内参载体共转染HepG2细胞,进行报告基因的活性检测.结果:构建了报告基因载体、内参载体和microRNA146a真核表达载体,经酶切和测序鉴定正确；microRNA146a真核表达载体转染细胞72 h后,经荧光显微镜观察确认载体转染及表达；用实时定量PCR检测,microRNA 146a的表达水平显著上调(P＜0.01)；用构建的报告基因系统检测,结果表明microRNA146a显著地抑制了含CFH 3'UTR的报告基因的活性(P＜0.05).结论:构建了一种新型的报告基因载体系统,该系统可用于miRNA靶基因的鉴定.
목적:구건용우감정microRNA파기인적보고기인계통.방법:재pGL3-Basic재체적luc기인상유삽입CMV계동자,하유삽입용우극륭파기인3'UTR적다극륭위점,구건보고기인재체pMIR-luciferase；장pMIR-lu-ciferase재체적luc기인체환성Rluc기인,구건내삼재체pMIR-control；장보체인자H(CFH)적3′UTR삽입pMIR-luciferase재체적다극륭위점처,구건함유CFH 3′UTR적보고기인재체；용pIRES2-EGFP재체구건microRNA146a 진핵표체재체；장함유CFH 3′UTR적보고기인재체、microRNA146a진핵표체재체급내삼재체공전염HepG2세포,진행보고기인적활성검측.결과:구건료보고기인재체、내삼재체화microRNA146a진핵표체재체,경매절화측서감정정학；microRNA146a진핵표체재체전염세포72 h후,경형광현미경관찰학인재체전염급표체；용실시정량PCR검측,microRNA 146a적표체수평현저상조(P＜0.01)；용구건적보고기인계통검측,결과표명microRNA146a현저지억제료함CFH 3'UTR적보고기인적활성(P＜0.05).결론:구건료일충신형적보고기인재체계통,해계통가용우miRNA파기인적감정.