热带作物学报
熱帶作物學報
열대작물학보
CHINESE JOURNAL OF TROPICAL CROPS
2011年
6期
993-997
,共5页
李晓君%王俊刚%武媛丽%张树珍
李曉君%王俊剛%武媛麗%張樹珍
리효군%왕준강%무원려%장수진
ShSAP1%pTCK303%载体%RNA干扰%基因功能
ShSAP1%pTCK303%載體%RNA榦擾%基因功能
ShSAP1%pTCK303%재체%RNA간우%기인공능
植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值.本研究通过构建ShSA P1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析.将ShSA P1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定.经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株.本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础.
植物中具有A20/AN1鋅指結構域的蛋白參與瞭逆境應答,為研究甘蔗A20/AN1型鋅指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育種方麵的價值.本研究通過構建ShSA P1基因的RNAi載體併進行甘蔗的遺傳轉化,以期通過反嚮遺傳學進行ShSAP1的功能分析.將ShSA P1鋅指編碼區片段分彆以正嚮和反嚮插入到中間載體pTCK303內含子的兩側,構建中間載體pTCK-iShSAP1,而後把榦擾片段連入pCAMBIA-GUS中,穫得RNAi錶達載體pCAMBIA-iShSAP1,將該載體轉導根癌農桿菌EHA105,通過農桿菌介導法侵染甘蔗胚性愈傷組織,併對部分轉化幼苗進行瞭初步的PCR鑒定.經過限製性內切酶分析和測序驗證,RNAi載體pCAMBIA-iShSAP1構建成功;轉化幼苗經PPT抗性篩選後,穫得瞭58株抗性植株,對抗性幼苗進行瞭Bar基因的PCR檢測,得到6株PCR暘性植株.本研究完成瞭ShSAP1的RNAi載體構建及對甘蔗的遺傳轉化,為ShSAP1的功能研究打下瞭一定的基礎.
식물중구유A20/AN1자지결구역적단백삼여료역경응답,위연구감자A20/AN1형자지단백기인ShSAP1적공능급재감자항역육충방면적개치.본연구통과구건ShSA P1기인적RNAi재체병진행감자적유전전화,이기통과반향유전학진행ShSAP1적공능분석.장ShSA P1자지편마구편단분별이정향화반향삽입도중간재체pTCK303내함자적량측,구건중간재체pTCK-iShSAP1,이후파간우편단련입pCAMBIA-GUS중,획득RNAi표체재체pCAMBIA-iShSAP1,장해재체전도근암농간균EHA105,통과농간균개도법침염감자배성유상조직,병대부분전화유묘진행료초보적PCR감정.경과한제성내절매분석화측서험증,RNAi재체pCAMBIA-iShSAP1구건성공;전화유묘경PPT항성사선후,획득료58주항성식주,대항성유묘진행료Bar기인적PCR검측,득도6주PCR양성식주.본연구완성료ShSAP1적RNAi재체구건급대감자적유전전화,위ShSAP1적공능연구타하료일정적기출.
