中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2003年
12期
955-960
,共6页
肖鹤%张纪岩%于鸣%沈倍奋%李松%黎燕
肖鶴%張紀巖%于鳴%瀋倍奮%李鬆%黎燕
초학%장기암%우명%침배강%리송%려연
共转染%融合表达%细胞模型%细胞凋亡%竞争抑制
共轉染%融閤錶達%細胞模型%細胞凋亡%競爭抑製
공전염%융합표체%세포모형%세포조망%경쟁억제
目的建立FKBP12/BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,并利用阳性药物对其进行鉴定.方法RT-PCR扩增鼠源性BAX全长基因,插入pUC18载体进行测序鉴定.将鉴定正确的mBAX插入载体pC4FV1E中,构建pC4FV1E/BAX表达质粒.将表达质粒与pcDNA3.1共转染HEK293细胞,建立pC4FV1E/BAX-neo和neo基因稳定表达的细胞模型.利用形态学方法、流式细胞术等对化学药物诱导FKBP12/BAX双聚体介导的细胞凋亡进行定性及定量的分析.结果RT-PCR、Western blot法分别从mRNA及蛋白水平检测到FKBP12-mBAX融合基因的整合及表达;阳性化合物AP20187作用4～6 h后,Giemsa染色可见明显的凋亡小体;钙依赖核酸内切酶亦被激活,出现典型的"DNA ladder";天然产物FK506可竞争性地抑制这种阳性药物诱导的细胞凋亡.结论FKBP12/BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型的建立,为FK506类小分子化合药物的高通量筛选提供可应用的技术平台.
目的建立FKBP12/BAX雙聚體可誘導細胞凋亡生物效應的細胞模型,併利用暘性藥物對其進行鑒定.方法RT-PCR擴增鼠源性BAX全長基因,插入pUC18載體進行測序鑒定.將鑒定正確的mBAX插入載體pC4FV1E中,構建pC4FV1E/BAX錶達質粒.將錶達質粒與pcDNA3.1共轉染HEK293細胞,建立pC4FV1E/BAX-neo和neo基因穩定錶達的細胞模型.利用形態學方法、流式細胞術等對化學藥物誘導FKBP12/BAX雙聚體介導的細胞凋亡進行定性及定量的分析.結果RT-PCR、Western blot法分彆從mRNA及蛋白水平檢測到FKBP12-mBAX融閤基因的整閤及錶達;暘性化閤物AP20187作用4～6 h後,Giemsa染色可見明顯的凋亡小體;鈣依賴覈痠內切酶亦被激活,齣現典型的"DNA ladder";天然產物FK506可競爭性地抑製這種暘性藥物誘導的細胞凋亡.結論FKBP12/BAX雙聚體可誘導細胞凋亡生物效應的細胞模型的建立,為FK506類小分子化閤藥物的高通量篩選提供可應用的技術平檯.
목적건립FKBP12/BAX쌍취체가유도세포조망생물효응적세포모형,병이용양성약물대기진행감정.방법RT-PCR확증서원성BAX전장기인,삽입pUC18재체진행측서감정.장감정정학적mBAX삽입재체pC4FV1E중,구건pC4FV1E/BAX표체질립.장표체질립여pcDNA3.1공전염HEK293세포,건립pC4FV1E/BAX-neo화neo기인은정표체적세포모형.이용형태학방법、류식세포술등대화학약물유도FKBP12/BAX쌍취체개도적세포조망진행정성급정량적분석.결과RT-PCR、Western blot법분별종mRNA급단백수평검측도FKBP12-mBAX융합기인적정합급표체;양성화합물AP20187작용4～6 h후,Giemsa염색가견명현적조망소체;개의뢰핵산내절매역피격활,출현전형적"DNA ladder";천연산물FK506가경쟁성지억제저충양성약물유도적세포조망.결론FKBP12/BAX쌍취체가유도세포조망생물효응적세포모형적건립,위FK506류소분자화합약물적고통량사선제공가응용적기술평태.
