中华微生物学和免疫学杂志
中華微生物學和免疫學雜誌
중화미생물학화면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2006年
6期
567-570
,共4页
郭乃洲%王万相%严爱华%马达%周步全%景奉香%唐向荣
郭迺洲%王萬相%嚴愛華%馬達%週步全%景奉香%唐嚮榮
곽내주%왕만상%엄애화%마체%주보전%경봉향%당향영
显色法%芯片%结核分枝杆菌%利福平%异烟肼%耐药
顯色法%芯片%結覈分枝桿菌%利福平%異煙肼%耐藥
현색법%심편%결핵분지간균%리복평%이연정%내약
目的建立显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因的方法.方法设计4对地高辛标记引物,扩增结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4个基因部分片段,根据结核分枝杆菌利福平(RFP)和异烟肼(INH)4条耐药相关基因上8个位点的25种单核苷酸多态性设计探针制作芯片,扩增产物与芯片杂交,显色法判断结果;用该法检测46株结核分枝杆菌临床分离株.结果扩增产物琼脂糖电泳可见4条大小分别为165、181、245、315bpDNA条带;结核分枝杆菌菌液浓度为1.6×103/ml时,该法仍可检测到各位点野生及突变信号;19种非结核分枝杆菌标准株和9种非分枝杆菌标准株扩增产物无DNA条带,与芯片杂交亦无信号,H37Rv结核分枝杆菌标准株芯片检测各位点均为野生型;5株结核分枝杆菌临床分离株重复检测5次,结果完全一致;6份PCR产物的测序结果与芯片检测结果完全一致;46株结核分枝杆菌临床分离株中,RFP耐药株28株,芯片检出突变株24株,突变率为85.7%,RFP敏感株18株,芯片检出突变株2株.INH耐药株31株,芯片检出突变株20株,突变率为64.5%,INH敏感株15株,芯片检出突变株4株.结论显色法芯片检测结核分枝杆菌耐药基因具有较高的敏感性和特异性,无需特殊仪器设备,有一定的推广应用价值.
目的建立顯色法芯片檢測結覈分枝桿菌耐藥基因的方法.方法設計4對地高辛標記引物,擴增結覈分枝桿菌rpoB、katG、inhA和ahpC 4箇基因部分片段,根據結覈分枝桿菌利福平(RFP)和異煙肼(INH)4條耐藥相關基因上8箇位點的25種單覈苷痠多態性設計探針製作芯片,擴增產物與芯片雜交,顯色法判斷結果;用該法檢測46株結覈分枝桿菌臨床分離株.結果擴增產物瓊脂糖電泳可見4條大小分彆為165、181、245、315bpDNA條帶;結覈分枝桿菌菌液濃度為1.6×103/ml時,該法仍可檢測到各位點野生及突變信號;19種非結覈分枝桿菌標準株和9種非分枝桿菌標準株擴增產物無DNA條帶,與芯片雜交亦無信號,H37Rv結覈分枝桿菌標準株芯片檢測各位點均為野生型;5株結覈分枝桿菌臨床分離株重複檢測5次,結果完全一緻;6份PCR產物的測序結果與芯片檢測結果完全一緻;46株結覈分枝桿菌臨床分離株中,RFP耐藥株28株,芯片檢齣突變株24株,突變率為85.7%,RFP敏感株18株,芯片檢齣突變株2株.INH耐藥株31株,芯片檢齣突變株20株,突變率為64.5%,INH敏感株15株,芯片檢齣突變株4株.結論顯色法芯片檢測結覈分枝桿菌耐藥基因具有較高的敏感性和特異性,無需特殊儀器設備,有一定的推廣應用價值.
목적건립현색법심편검측결핵분지간균내약기인적방법.방법설계4대지고신표기인물,확증결핵분지간균rpoB、katG、inhA화ahpC 4개기인부분편단,근거결핵분지간균리복평(RFP)화이연정(INH)4조내약상관기인상8개위점적25충단핵감산다태성설계탐침제작심편,확증산물여심편잡교,현색법판단결과;용해법검측46주결핵분지간균림상분리주.결과확증산물경지당전영가견4조대소분별위165、181、245、315bpDNA조대;결핵분지간균균액농도위1.6×103/ml시,해법잉가검측도각위점야생급돌변신호;19충비결핵분지간균표준주화9충비분지간균표준주확증산물무DNA조대,여심편잡교역무신호,H37Rv결핵분지간균표준주심편검측각위점균위야생형;5주결핵분지간균림상분리주중복검측5차,결과완전일치;6빈PCR산물적측서결과여심편검측결과완전일치;46주결핵분지간균림상분리주중,RFP내약주28주,심편검출돌변주24주,돌변솔위85.7%,RFP민감주18주,심편검출돌변주2주.INH내약주31주,심편검출돌변주20주,돌변솔위64.5%,INH민감주15주,심편검출돌변주4주.결론현색법심편검측결핵분지간균내약기인구유교고적민감성화특이성,무수특수의기설비,유일정적추엄응용개치.
