CAJ | 학술논문

目的通过基因克隆、序列分析以及在大肠埃希菌中的表达和分离纯化,研究上海地区1株SARS-CovN蛋白编码基因变异情况,为SARS-Cov N蛋白应用于检测SARS感染作基础.方法用RT-PCR法从患者血清样品中扩增获取SARS-Cov N蛋白编码基因,并重组于质粒pGEX-2T.双脱氧法双向测定N基因序列,与GenBank公布的89株SARS-Cov N基因序列比对分析;重组N蛋白编码基因在E.coli中表达,亲和层析法分离纯化表达产物.结果RT-PCR扩增获取SARS-Coy N基因1 269 bp,测定的核酸序列与GenBank中公布SARS-Coy N基因序列比对,变异位点数1～4 bp,其中导致1～3个编码氨基酸突变.重组N基因的表达质粒pGEX-2T/SARS-Cov N转化大肠埃希菌JM109,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,N基因在大肠埃希菌中高效表达,经亲和层析,得纯度＞90%的表达产物,表达的融合蛋白分子量为74000 Da.结论上海地区1株SARS-Coy N蛋白编码基因与已公布的89株毒株核酸同源性为99.92%～99.68%,编码氨基酸同源性为99.8%～99.3%;该基因在E.coli中表达,经分离纯化得到高纯度表达产物,为进一步应用于SARS-Cov感染检测打下基础.
목적통과기인극륭、서렬분석이급재대장애희균중적표체화분리순화,연구상해지구1주SARS-CovN단백편마기인변이정황,위SARS-Cov N단백응용우검측SARS감염작기출.방법용RT-PCR법종환자혈청양품중확증획취SARS-Cov N단백편마기인,병중조우질립pGEX-2T.쌍탈양법쌍향측정N기인서렬,여GenBank공포적89주SARS-Cov N기인서렬비대분석;중조N단백편마기인재E.coli중표체,친화층석법분리순화표체산물.결과RT-PCR확증획취SARS-Coy N기인1 269 bp,측정적핵산서렬여GenBank중공포SARS-Coy N기인서렬비대,변이위점수1～4 bp,기중도치1～3개편마안기산돌변.중조N기인적표체질립pGEX-2T/SARS-Cov N전화대장애희균JM109,경이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도,N기인재대장애희균중고효표체,경친화층석,득순도＞90%적표체산물,표체적융합단백분자량위74000 Da.결론상해지구1주SARS-Coy N단백편마기인여이공포적89주독주핵산동원성위99.92%～99.68%,편마안기산동원성위99.8%～99.3%;해기인재E.coli중표체,경분리순화득도고순도표체산물,위진일보응용우SARS-Cov감염검측타하기출.