CAJ | 학술논문

目的:观察人骨髓间充质干细胞膜上钙离子通道的激活、失活峰值与离子通道选择性等电生理学特性,为研究干细胞在分化过程中离子通道变化奠定基础.方法:选择泸州医学院附属医院耳鼻咽喉科2004-03/2005-04获得正常发育的人捐献的骨髓标本10例.采用梯度离心法和单层贴附培养法分离,纯化,获取人骨髓间充质干细胞,选取传代第1～2代生长活性良好的人骨髓间充质干细胞进行全细胞膜片钳的记录与分析.实验采用PC-ⅡB型膜片钳放大器(华中理工大学研制),由计算机发出指令经数字量数据/模拟量数据转换经放大器输出到细胞,细胞信号由放大器放大再经模/数转换后记录到计算机,保存在数字硬盘上供分析调读,记录与分析软件为IBBClamp,采样间隔100μs.通过设定不同的实验程序,记录通道电流的幅度,激活和失活电流的峰值与时程,离子通道的选择性,Ⅰ-Ⅴ曲线.结果:①纳入10例骨髓标本,8例成功分离、培养出骨髓间充质干细胞,2例培养出现细菌污染.②原代培养的骨髓间充质干细胞形态较均一,主要为梭形,其生长特点为:24～48 h内贴壁,3～9 d进入对数生长期,9～12 d进入生长平台期.③在8例成功培养细胞中,有7例骨髓间充质干细胞可成功记录到离子通道电流,并均可记录到对Nicardipine阻断剂敏感的钙离子通道电流,该钙离子通道电流表现特点为:在阻断骨髓间充质干细胞膜上钠、钾电流后,当钳制为-90 mV,膜上钙离子电流可被连续记录,从-110到-10 mV持续钳制用10 mV阶跃去极化,在-60 mV获得钙离子通道的反转电流.结论:人骨髓间充质干细胞膜上用全细胞电压膜片钳可记录到钙离子通道电流,其电生理学特性符合非兴奋细胞膜上的钙离子通道特点.
목적:관찰인골수간충질간세포막상개리자통도적격활、실활봉치여리자통도선택성등전생이학특성,위연구간세포재분화과정중리자통도변화전정기출.방법:선택로주의학원부속의원이비인후과2004-03/2005-04획득정상발육적인연헌적골수표본10례.채용제도리심법화단층첩부배양법분리,순화,획취인골수간충질간세포,선취전대제1～2대생장활성량호적인골수간충질간세포진행전세포막편겸적기록여분석.실험채용PC-ⅡB형막편겸방대기(화중리공대학연제),유계산궤발출지령경수자량수거/모의량수거전환경방대기수출도세포,세포신호유방대기방대재경모/수전환후기록도계산궤,보존재수자경반상공분석조독,기록여분석연건위IBBClamp,채양간격100μs.통과설정불동적실험정서,기록통도전류적폭도,격활화실활전류적봉치여시정,리자통도적선택성,Ⅰ-Ⅴ곡선.결과:①납입10례골수표본,8례성공분리、배양출골수간충질간세포,2례배양출현세균오염.②원대배양적골수간충질간세포형태교균일,주요위사형,기생장특점위:24～48 h내첩벽,3～9 d진입대수생장기,9～12 d진입생장평태기.③재8례성공배양세포중,유7례골수간충질간세포가성공기록도리자통도전류,병균가기록도대Nicardipine조단제민감적개리자통도전류,해개리자통도전류표현특점위:재조단골수간충질간세포막상납、갑전류후,당겸제위-90 mV,막상개리자전류가피련속기록,종-110도-10 mV지속겸제용10 mV계약거겁화,재-60 mV획득개리자통도적반전전류.결론:인골수간충질간세포막상용전세포전압막편겸가기록도개리자통도전류,기전생이학특성부합비흥강세포막상적개리자통도특점.