应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2007年
3期
309-312
,共4页
李振秋%王花红%王红%李国凤%叶和春
李振鞦%王花紅%王紅%李國鳳%葉和春
리진추%왕화홍%왕홍%리국봉%협화춘
鲨烯合酶%大肠杆菌表达%功能鉴定%青蒿
鯊烯閤酶%大腸桿菌錶達%功能鑒定%青蒿
사희합매%대장간균표체%공능감정%청호
利用PCR方法,将经RACE方法克隆到的中药青蒿鲨烯合酶cDNA(AF302464)开放阅读框的3'末端截短99bp,插入到原核表达载体pET30a(+)的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,构建N端和C端均携带有HIS6表达标签的鲨烯合酶重组表达载体pETSSA.将pETSSA转入大肠杆菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG(isopropyl-beta-D-thiogalactoside)28 ℃诱导重组鲨烯合酶的表达.表达产物经镍琼脂糖柱纯化.纯化蛋白加入酶促反应体系(含FPP和NADPH),GC-MS分析酶促反应体系的正己烷萃取物,结果显示重组鲨烯合酶可以催化FPP向鲨烯的转化.青蒿鲨烯合酶的功能鉴定为进一步利用反义或RNAi技术限制甾类生物合成,从而提高青蒿中的青蒿素含量提供了基础.
利用PCR方法,將經RACE方法剋隆到的中藥青蒿鯊烯閤酶cDNA(AF302464)開放閱讀框的3'末耑截短99bp,插入到原覈錶達載體pET30a(+)的NcoⅠ和BamHⅠ酶切位點之間,構建N耑和C耑均攜帶有HIS6錶達標籤的鯊烯閤酶重組錶達載體pETSSA.將pETSSA轉入大腸桿菌BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG(isopropyl-beta-D-thiogalactoside)28 ℃誘導重組鯊烯閤酶的錶達.錶達產物經鎳瓊脂糖柱純化.純化蛋白加入酶促反應體繫(含FPP和NADPH),GC-MS分析酶促反應體繫的正己烷萃取物,結果顯示重組鯊烯閤酶可以催化FPP嚮鯊烯的轉化.青蒿鯊烯閤酶的功能鑒定為進一步利用反義或RNAi技術限製甾類生物閤成,從而提高青蒿中的青蒿素含量提供瞭基礎.
이용PCR방법,장경RACE방법극륭도적중약청호사희합매cDNA(AF302464)개방열독광적3'말단절단99bp,삽입도원핵표체재체pET30a(+)적NcoⅠ화BamHⅠ매절위점지간,구건N단화C단균휴대유HIS6표체표첨적사희합매중조표체재체pETSSA.장pETSSA전입대장간균BL21(DE3),0.5 mmol/L IPTG(isopropyl-beta-D-thiogalactoside)28 ℃유도중조사희합매적표체.표체산물경얼경지당주순화.순화단백가입매촉반응체계(함FPP화NADPH),GC-MS분석매촉반응체계적정기완췌취물,결과현시중조사희합매가이최화FPP향사희적전화.청호사희합매적공능감정위진일보이용반의혹RNAi기술한제치류생물합성,종이제고청호중적청호소함량제공료기출.
