遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2008年
5期
649-654
,共6页
陈惠%胥兵%廖俊华%官兴颖%吴琦
陳惠%胥兵%廖俊華%官興穎%吳琦
진혜%서병%료준화%관흥영%오기
巨大芽孢杆菌%内切葡聚糖酶%基因表达%酶学性质
巨大芽孢桿菌%內切葡聚糖酶%基因錶達%酶學性質
거대아포간균%내절포취당매%기인표체%매학성질
通过PCR方法将已克隆的内切葡聚糖酶基因(GenBank No.DQ782954)信号肽编码序列去除,然后与表达载体pHIS1525连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5 α-pHIS1525-G7并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌WH320原生质体,获得基因工程菌WH320-pHIS1525-G7.刚果红染色和SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达.基因工程菌经优化培养后,胞外上清液中的酶活力可达889 U,是出发菌株(即枯草芽孢杆菌C-36)的11.22倍.酶学性质研究表明:该酶的最适反应温度与pH值分别为65℃与pH6.0,在pH 4.5～10.0范围内50℃保温30min可保持在最高酶活的80%以上.
通過PCR方法將已剋隆的內切葡聚糖酶基因(GenBank No.DQ782954)信號肽編碼序列去除,然後與錶達載體pHIS1525連接後轉化大腸桿菌DH5α,篩選齣暘性轉化子DH5 α-pHIS1525-G7併提取質粒進一步轉化巨大芽孢桿菌WH320原生質體,穫得基因工程菌WH320-pHIS1525-G7.剛果紅染色和SDS-PAGE分析錶明該基因在巨大芽孢桿菌中得到瞭有效錶達.基因工程菌經優化培養後,胞外上清液中的酶活力可達889 U,是齣髮菌株(即枯草芽孢桿菌C-36)的11.22倍.酶學性質研究錶明:該酶的最適反應溫度與pH值分彆為65℃與pH6.0,在pH 4.5～10.0範圍內50℃保溫30min可保持在最高酶活的80%以上.
통과PCR방법장이극륭적내절포취당매기인(GenBank No.DQ782954)신호태편마서렬거제,연후여표체재체pHIS1525련접후전화대장간균DH5α,사선출양성전화자DH5 α-pHIS1525-G7병제취질립진일보전화거대아포간균WH320원생질체,획득기인공정균WH320-pHIS1525-G7.강과홍염색화SDS-PAGE분석표명해기인재거대아포간균중득도료유효표체.기인공정균경우화배양후,포외상청액중적매활력가체889 U,시출발균주(즉고초아포간균C-36)적11.22배.매학성질연구표명:해매적최괄반응온도여pH치분별위65℃여pH6.0,재pH 4.5～10.0범위내50℃보온30min가보지재최고매활적80%이상.
