生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
2期
187-191
,共5页
DC-SIGN%蛋白表达%多克隆抗体%Western blotting%免疫荧光
DC-SIGN%蛋白錶達%多剋隆抗體%Western blotting%免疫熒光
DC-SIGN%단백표체%다극륭항체%Western blotting%면역형광
旨在构建DC-SIGN胞外区基因原核表达质粒,诱导蛋白表达并制备多克隆抗体.用PCR的方法扩增编码DC-SIGN胞外区的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达DC-SIGN胞外区蛋白,用His抗体做Western Blotting鉴定目的蛋白的免疫原性.用纯化的DC-SIGN胞外区蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,免疫荧光法检测其特异性.结果显示,原核表达载体pET-28a(+)-DC-SIGN胞外区基因成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得相对分子质量约20kD的DC-SIGN胞外区蛋白,经Westernblotting鉴定为正确.纯化后的蛋白免疫大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫原性和特异性.本研究得到了纯化的DC-SIGN胞外区蛋白,并制备了具有特异性和高效价的抗体,为研究DC-SIGN生物学功能提供试验基础.
旨在構建DC-SIGN胞外區基因原覈錶達質粒,誘導蛋白錶達併製備多剋隆抗體.用PCR的方法擴增編碼DC-SIGN胞外區的基因序列,將其剋隆到原覈錶達載體pET-28a(+)中,利用大腸桿菌錶達繫統錶達DC-SIGN胞外區蛋白,用His抗體做Western Blotting鑒定目的蛋白的免疫原性.用純化的DC-SIGN胞外區蛋白免疫日本大耳白兔,製備多剋隆抗體.通過酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測抗體效價,免疫熒光法檢測其特異性.結果顯示,原覈錶達載體pET-28a(+)-DC-SIGN胞外區基因成功構建,可在大腸桿菌BL21(DE3)中高效錶達,穫得相對分子質量約20kD的DC-SIGN胞外區蛋白,經Westernblotting鑒定為正確.純化後的蛋白免疫大耳白兔,製備的多剋隆抗體具有較彊免疫原性和特異性.本研究得到瞭純化的DC-SIGN胞外區蛋白,併製備瞭具有特異性和高效價的抗體,為研究DC-SIGN生物學功能提供試驗基礎.
지재구건DC-SIGN포외구기인원핵표체질립,유도단백표체병제비다극륭항체.용PCR적방법확증편마DC-SIGN포외구적기인서렬,장기극륭도원핵표체재체pET-28a(+)중,이용대장간균표체계통표체DC-SIGN포외구단백,용His항체주Western Blotting감정목적단백적면역원성.용순화적DC-SIGN포외구단백면역일본대이백토,제비다극륭항체.통과매련면역흡부시험(ELISA)검측항체효개,면역형광법검측기특이성.결과현시,원핵표체재체pET-28a(+)-DC-SIGN포외구기인성공구건,가재대장간균BL21(DE3)중고효표체,획득상대분자질량약20kD적DC-SIGN포외구단백,경Westernblotting감정위정학.순화후적단백면역대이백토,제비적다극륭항체구유교강면역원성화특이성.본연구득도료순화적DC-SIGN포외구단백,병제비료구유특이성화고효개적항체,위연구DC-SIGN생물학공능제공시험기출.
