CAJ | 학술논문

建立了亲水作用色谱(HILIC)测定组织中全基因组DNA甲基化水平的方法.采用苯酚-氯仿提取组织中的DNA,提取的DNA用88%甲酸在140℃下裂解,经N2吹干后,加乙腈-水(9:1,v/v)溶解,用Waters BEH HILIC柱进行分离,在277 nn波长下检测胞嘧啶(Cyt)及5-甲基胞嘧啶(5-mCyt)含量.结果表明,以乙腈-10 mmol/L甲酸铵溶液(94:6,v/v)为流动相,流速为0.5 mL/min,Cyt与5-mCyt分离较好,保留时间分别为2.6与3.1min.胞嘧啶的线性范围为1～900 μmol/L,相关系数为0.999 9;5-甲基胞嘧啶的线性范围为1～64 μmol/L,相关系数为0.999 8.胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的检出限为54 nmol/L(柱中为0.54 pmol),定量限为250 nmol/L(柱中为2.5 pmol);在5～900 μmol/L的添加水平下,胞嘧啶和5-甲基胞嘧啶的平均加标回收率为94.7%～100.5%,相对标准偏差小于1.48%.用该方法检测了结肠癌组织中DNA甲基化水平,结果显示该癌组织中全基因组的DNA甲基化均值为4.0%.该方法快速、简单,稳定性好,灵敏度较高,能满足全基因组DNA甲基化的检测要求.
건립료친수작용색보(HILIC)측정조직중전기인조DNA갑기화수평적방법.채용분분-록방제취조직중적DNA,제취적DNA용88%갑산재140℃하렬해,경N2취간후,가을정-수(9:1,v/v)용해,용Waters BEH HILIC주진행분리,재277 nn파장하검측포밀정(Cyt)급5-갑기포밀정(5-mCyt)함량.결과표명,이을정-10 mmol/L갑산안용액(94:6,v/v)위류동상,류속위0.5 mL/min,Cyt여5-mCyt분리교호,보류시간분별위2.6여3.1min.포밀정적선성범위위1～900 μmol/L,상관계수위0.999 9;5-갑기포밀정적선성범위위1～64 μmol/L,상관계수위0.999 8.포밀정화5-갑기포밀정적검출한위54 nmol/L(주중위0.54 pmol),정량한위250 nmol/L(주중위2.5 pmol);재5～900 μmol/L적첨가수평하,포밀정화5-갑기포밀정적평균가표회수솔위94.7%～100.5%,상대표준편차소우1.48%.용해방법검측료결장암조직중DNA갑기화수평,결과현시해암조직중전기인조적DNA갑기화균치위4.0%.해방법쾌속、간단,은정성호,령민도교고,능만족전기인조DNA갑기화적검측요구.