中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
9期
778-782
,共5页
栗永茂%曹胜波%陈龙%霍雨艳%熊涛%吴光旭
慄永茂%曹勝波%陳龍%霍雨豔%熊濤%吳光旭
률영무%조성파%진룡%곽우염%웅도%오광욱
NS5%原核表达%亚细胞定位%乙型脑炎病毒
NS5%原覈錶達%亞細胞定位%乙型腦炎病毒
NS5%원핵표체%아세포정위%을형뇌염병독
目的 对乙型脑炎病毒NS5蛋白进行原核表达和亚细胞定位研究.方法 通过PCR扩增乙型脑炎病毒NS5基因,并将之克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞,经IPTG诱导表达目的蛋白.将表达产物纯化后,免疫BALB/c小鼠,制备NS5蛋白特异性的多克隆抗体.同时,构建NS5基因与绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的真核表达质粒pcDNA-NS5-EGFP,将之转染BHK-21细胞,利用激光共聚焦荧光显微镜观察NS5蛋白在BHK-21细胞中的亚细胞定位.结果 NS5蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,表达蛋白分子量大小约为103kD,该蛋白在真核细胞中的表达呈颗粒状不均匀分布于整个细胞,且颗粒状主要分布在细胞质中.结论 成功表达乙型脑炎病毒NS5蛋白,并对NS5蛋白的亚细胞定位进行了分析,为进一步研究NS5蛋白提供依据.
目的 對乙型腦炎病毒NS5蛋白進行原覈錶達和亞細胞定位研究.方法 通過PCR擴增乙型腦炎病毒NS5基因,併將之剋隆至原覈錶達載體pET-28a(+)中,構建的重組錶達載體轉化大腸桿菌感受態細胞,經IPTG誘導錶達目的蛋白.將錶達產物純化後,免疫BALB/c小鼠,製備NS5蛋白特異性的多剋隆抗體.同時,構建NS5基因與綠色熒光蛋白(EGFP)融閤錶達的真覈錶達質粒pcDNA-NS5-EGFP,將之轉染BHK-21細胞,利用激光共聚焦熒光顯微鏡觀察NS5蛋白在BHK-21細胞中的亞細胞定位.結果 NS5蛋白在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,錶達蛋白分子量大小約為103kD,該蛋白在真覈細胞中的錶達呈顆粒狀不均勻分佈于整箇細胞,且顆粒狀主要分佈在細胞質中.結論 成功錶達乙型腦炎病毒NS5蛋白,併對NS5蛋白的亞細胞定位進行瞭分析,為進一步研究NS5蛋白提供依據.
목적 대을형뇌염병독NS5단백진행원핵표체화아세포정위연구.방법 통과PCR확증을형뇌염병독NS5기인,병장지극륭지원핵표체재체pET-28a(+)중,구건적중조표체재체전화대장간균감수태세포,경IPTG유도표체목적단백.장표체산물순화후,면역BALB/c소서,제비NS5단백특이성적다극륭항체.동시,구건NS5기인여록색형광단백(EGFP)융합표체적진핵표체질립pcDNA-NS5-EGFP,장지전염BHK-21세포,이용격광공취초형광현미경관찰NS5단백재BHK-21세포중적아세포정위.결과 NS5단백재대장간균중획득료고효표체,표체단백분자량대소약위103kD,해단백재진핵세포중적표체정과립상불균균분포우정개세포,차과립상주요분포재세포질중.결론 성공표체을형뇌염병독NS5단백,병대NS5단백적아세포정위진행료분석,위진일보연구NS5단백제공의거.
